[发明专利]一种脂肪源干细胞提取制备方法

说明书

本发明公开一种脂肪源干细胞提取制备方法，其制备用液包括：I型胶原酶、EDTA、PBS和生理盐水。制备流程包括：取样、剪碎、消毒冲洗、酶解、分离、孵育、检测和定向培养。本发明在提取培养前使用PBS冲洗，并用生理盐水浸泡，消除了脂肪组织表面所附着的细菌，避免了在培养过程中细菌污染脂肪组织造成培养错误的问题；在温度为37℃的环境下培育细胞，模仿人体的温度环境，使得培育出的细胞能适应人体环境。

技术领域

本发明属于干细胞制备领域，具体涉及一种脂肪源干细胞提取制备方法。

背景技术

干细胞即起源细胞，“干”字含有“起源、发生”的意思。干细胞，顾名思义，是能发育成机体其他组织器官的细胞，是指尚未发育成熟的细胞，它具有多分化潜能和自我复制的功能。在特定条件下，可以分化成不同的功能细胞，形成多种组织和器官。医学界期望能够用干细胞来修复那些损坏组织或器官，因此称其为“万能细胞”。干细胞在治疗慢性病、美容、抗衰老、护肤品等等领域应用十分广泛，1999年美国《科学》杂志推举干细胞为21世纪最重要的十项研究领域之一，且位居第一。2000年，干细胞再度入选《科学》评选的十大科技成就。2001年年底《科学》又将其置于2002年值得关注的六大热门科技领域之首。干细胞已然成为成为21世纪最具研究价值领域，其为了发展前景巨大。

脂肪源干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种多向分化潜能的干细胞。该细胞增殖能力强，体外培养能保持稳定的生长增殖活性，且具有多项分化潜能，已被应用到美容治疗中。脂肪源干细胞主要恢复组织细胞的修复能力，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正有效的抵抗衰老。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脂肪源干细胞提取制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种脂肪源干细胞提取制备方法，制备流程包括：取样、剪碎、消毒冲洗、酶解、分离、孵育、检测和定向培养，具体提取制备方法如下：

S1、取样：用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织；

S2、剪碎：将吸取到的深层脂肪组织剪碎；

S3、消毒冲洗：将深层脂肪组织碎块用PBS冲洗，用酒精棉擦拭干净，再用生理盐水浸泡；

S4、酶解：向消毒冲洗后的深层脂肪组织碎块中加入I型胶原酶和EDTA的混合液，并在37℃水浴中充分振荡；

S5、分离：向酶解后的深层脂肪组织碎块中加入适量PBS混合过滤后，再低速离心；

S6、孵育：在温度为37℃、含有CO₂的培养箱中培育，48小时后首次换液，弃去悬浮细胞，随后每3天换液一次，传代后，此时细胞从组织块中生长为原代细胞；

S7、检测：将传代两次的第3代细胞用流式细胞仪进行检测，观察细胞是否浓集到128个/升；

S8、定向培养：当细胞浓集到128个/升时，转入培养基中定向培养2周，得到脂肪源干细胞。

S1、取样：用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织10ml；

S2、剪碎：将吸取到的深层脂肪组织剪至大小为2mm的碎块；

S3、消毒冲洗：将深层脂肪组织碎块用PBS冲洗5次，用酒精棉擦拭干净，再用生理盐水浸泡2分钟；

S4、酶解：向消毒冲洗后的深层脂肪组织碎块中加入10ml体积比为1:3的 I型胶原酶和EDTA的混合液，并在37℃水浴中充分振荡30分钟；

S5、分离：向酶解后的深层脂肪组织碎块中加入适量PBS混合过滤后，再低速离心10分钟，控制离心转速为800r/min；