[发明专利]基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂

权利要求书

1.一种基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂，其特征在于，所述基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂由菌酶母液、填充料、保护剂组成；按质量计，填充料为菌酶母液质量的5～15％、保护剂为菌酶母液质量的5～20％；

所述菌酶母液由植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌及胰凝乳蛋白酶组成；所述植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌菌体活菌数10⁶～10⁹cfu/mL；所述植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌分别培养至11～15h、7～12h、5～16h后6000rpm进行冷冻离心浓缩；按按菌泥体积比植物乳杆菌：乳酸片球菌：戊糖片球菌为100：(10～100)：(10～100)；所述胰蛋白酶的添加量为0.5～3.5mL/100g鱼肉，所述胰蛋白酶含量为10000～20000U/mL；

所述填充料为喷雾干燥填充料、真空冷冻干燥填充料、微波干燥填充料中的一种；所述喷雾干燥填充料，按质量比由2～6％的可溶性淀粉、2～6％的脱脂奶粉组成；真空冷冻干燥填充料按质量比由5％～10％的预糊化淀粉、2％～6％的脱脂奶粉组成；微波干燥填充料按质量比由0.5％～2％淀粉和0.5％～2％麦芽糊精组成；

所述保护剂分别为喷雾干燥保护剂、真空冷冻干燥保护剂、微波干燥保护剂三者中的其中一种；所述喷雾干燥保护剂按质量比由1～5％甘油、4～8％蔗糖、1～5％明胶组成；真空冷冻干燥保护剂按质量比由1～3％胶原小肽、4～8％海藻糖、1～4％β-环糊精组成；微波干燥保护剂按质量比由0.5～2％蔗糖、0.1～1％甘油、0.5～2％脱脂乳和0.5％～2％海藻酸钠组成。

2.一种如权利要求1所述基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂的制备方法，其特征在于，所述基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一，菌种的制备：植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌均采用MRS琼脂培养基活化2次，30℃培养分别培养至48h；接种至200m L MRS液体培养基分别培养11～15h、7～12h、5～16h，使菌体活菌数均达到10⁶～10⁹cfu/mL；4℃6000rpm冷冻离心，菌体沉淀用无菌生理盐水清洗两次，重新悬浮于无菌生理盐水，4℃冰箱保存，24h内备用；

步骤二，菌酶母液的制备：步骤一得到的活菌数达到10⁶～10⁹cfu/mL的植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌在4℃6000rpm冷冻离心浓缩后，植物乳杆菌：乳酸片球菌：戊糖片球菌按菌泥体积比为100：(10～100)：(10～100)计，将菌泥混合，加入10000～20000U/mL胰蛋白酶液体；胰蛋白酶的添加量为0.5～3.5mL/100g鱼肉，获得菌酶母液；

步骤三，采用喷雾干燥、真空冷冻干燥或微波干燥中的一种进行干燥。

3.如权利要求2所述基于复合菌种结合胰蛋白酶的菌酶协同作用固态发酵剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一菌种制备前需进行菌种活化，具体包括：

(1)冷冻干燥管开管，用沾有70％酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加热外管的尖端，滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再敲破尖端，取出隔热纤维纸和内管，取出内管的棉塞；

(2)无菌吸管，吸取0.3-0.5mL指定的液体培养基，滴入管内并震荡，直到均匀悬浮；

(3)取0.1-0.2mL的菌体悬浮液于指定平板培养基上，做划线分离培养或做稀释，用无菌L型玻璃棒均匀涂抹，检验菌种的纯度及活化情况；剩余菌体全部移入指定液体培养基内，并依据指定温度培养。