[发明专利]完全抗原及其制备方法、应用和产品

说明书

本发明涉及免疫化学领域，具体而言，提供了一种完全抗原及其制备方法、应用和产品。本发明提供的完全抗原的制备方法，是在表面活性剂存在的条件下，将疏水性半抗原与载体进行偶联反应，得到完全抗原。本发明提供的该方法可以显著改善沉淀现象，偶联效率也得到大幅度提升，完全抗原活性高倍增加，极大地简化了制备工艺并且降低了成本。

技术领域

本发明涉及免疫化学领域，具体而言，涉及一种完全抗原及其制备方法、应用和产品。

背景技术

在单克隆抗体的生产过程中经常需要用到体外免疫的手段。而大多小分子化合物(分子量小于1万道尔顿)的一个特点是：具有反应原性，但是不具有免疫原性，不能直接免疫动物产生特异性抗体，所以也为半抗原。解决这一问题的方式是将这些小分子化合物与大分子载体结合，得到的结合物称为人工抗原或完全抗原。小分子化合物的另一个特点是：疏水性较强，比如维生素D、醛固酮、雌二醇等。该类小分子化合物在合成完全抗原的过程中经常会因为偶联了载体蛋白后由于偶联蛋白的疏水性增强而导致蛋白沉淀或者浑浊，从而导致完全抗原的活性下降或者增加整体生产的批间差控制难度，且为抵消因沉淀现象和失活情况而不得不增加半抗原小分子化合物的使用量，这点对比较难获取或较昂贵的小分子来说无疑是大大增加了研发成本或生产成本。

完全抗原的易凝集及活性下降在免疫单克隆抗体领域是常见问题，甚至在市面上不乏众多完全抗原类型的产品是沉淀或浑浊状态的，比如DIAsource的这类在卖产品也是有一定浑浊。故解决完全抗原生产过程的沉淀问题是很有市场前景且在优化产品性能中时很有必要的。

针对该类沉淀或浑浊问题，目前常规的解决方案是调整PH，调高或者调低，即使用更酸或更碱的缓冲体系，这无形中增加了完全抗原变性或失活的风险。另一种解决方案是调整缓冲对或载体浓度及小分子化合物使用量，并且要多因素考量三者的综合最佳点，这个条件的摸索就需要较复杂的工作量。此外，在需要高活性或高偶联比的完全抗原时，现有技术不得不增加疏水性小分子化合物的用量，这样又会进一步增加最后的偶联物或缀合物的疏水性，从而使得易沉降程度大大增加，这种程度甚至无法通过调整缓冲对和调整PH进行优化。故急需寻找简捷高效且成本低的方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种完全抗原的制备方法，该方法可以缓解现有技术中完全抗原在制备过程及存储过程中出现的沉淀现象，完全抗原整体免疫活性低，批间差控制难度大，以及疏水性半抗原使用量大、成本高的问题。

本发明的第二目的在于提供上述制备方法制备得到的完全抗原，以缓解现有技术中完全抗原易凝集，稳定性差，使用活性低的问题。

本发明的第三目的在于提供上述完全抗原在制备抗体或免疫学检测中的应用。

本发明的第四目的在于提供一种含有本发明提供的完全抗原的试剂盒。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种完全抗原的制备方法，在表面活性剂存在的条件下，将疏水性半抗原与载体进行偶联反应，得到完全抗原。

进一步地，所述疏水性半抗原包括维生素D及其衍生物、醛固酮或雌二醇；

优选地，所述疏水性半抗原为维生素D及其衍生物，进一步优选为25-羟基维生素D3及其衍生物或1,25-二羟维生素D3及其衍生物。

进一步地，表面活性剂的亲油端含有10-18个碳原子的直链烷基，优选为亲油端含有12-16个碳原子的直链烷基；

优选地，所述表面活性剂包括亲油端含有10-18个碳原子的直链烷基的离子型表面活性剂，优选为亲油端含有12-16个碳原子的直链烷基的离子型表面活性剂；

优选地，表面活性剂包括十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基磺酸钠或十二烷基苯磺酸钠；