[发明专利]枯草芽孢杆菌的发酵方法及其菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

方法步骤中包含：

将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；

将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；

调整种子液培养基中的菌液浓度至10⁹个细胞/mL，作发酵用一级种子液；

将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；

将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。

3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；

和/或一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵12～18h，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌；

和/或二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养36～44h，发酵温度30～32℃，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m³/h，12h后，通气量为30m³/h。

4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

一级种子液按接种量为5～10％接种于发酵培养基；

和/或二级种子液按接种量为5～10％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。

5.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

种子液培养基置于培养器中；

和/或发酵培养基置于发酵罐A中；

和/或产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。

6.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为10⁹个细胞/mL。

7.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，

种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；

和/或产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.15～0.2％的米糠、1.2～1.5％的花生饼粉、0.015～0.025％的NaCl、0.020～0.025％的MnSO₄和余量的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。

8.一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，

方法步骤中包含：

步骤S1：以硅藻土为载体，加入采用如权利要求1～7任一项所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的20～25％；

步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的2.5～3％，氯化钙的体积为发酵液体积的1.5～2％；

步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，使其含水量低于10％，则制得菌剂。

9.根据权利要求8所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，

步骤S1中包含：

将采用如权利要求1～7任一项所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的20～25％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置1～2h，得到吸附发酵液；

和/或步骤S2中包含：

将体积为发酵液体积的2.5～3％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的1.5～2％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置30～60min，得到絮凝发酵液；

和/或步骤S3中包含：

将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，使得絮凝发酵液干燥至含水量低于10％，则制得菌剂。