[发明专利]一种供临床使用的脱细胞角膜基质的制备方法

权利要求书

1.一种供临床使用的脱细胞角膜基质的制备方法，包括：去除角膜上皮层之后削切得到预定厚度的板层角膜，其特征在于，还包括：

a)将削切后的角膜密封后置于液氮中冷冻；

b)将冷冻后的角膜置于水浴中解冻；

c)将解冻后的角膜放入脱细胞试剂中进行振荡处理；

d)将振荡处理后的角膜置于等渗液中进行超声处理，以脱除细胞；

e)将脱细胞后的角膜放入软化液中静置，再放入水中振荡处理；所述软化液具有促进角膜胶原微观结构恢复的作用，所述软化液含有聚乙烯比咯烷酮；所述脱细胞试剂包含0.2-1.0%中性蛋白酶和0.01-0.20%EDTA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述冷冻的时长为5-60min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b)所述水浴的温度是20-37℃，所述角膜在水浴中的持续时长是10-30min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述振荡处理是指：在4-45℃的脱细胞试剂中振荡10-120min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d)所述等渗液为生理盐水或/和PBS缓冲液；或者，步骤d)所述超声的频率为10-100kHz，超声持续时长为8-15min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，交替重复步骤a)和步骤b)1-5次，或者，交替重复步骤c)和步骤d)1-8次。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述软化液含有透明质酸、L-天冬氨酸中的一种或两种。

8.根据权利要求7所述的脱细胞方法，其特征在于：步骤e)所述软化液的温度为2-37℃，步骤e)所述静置的持续时长为10-60min，步骤e)所述振荡处理的持续时长为1-10min。