[发明专利]一种人呼吸道合胞病毒粘膜疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种由粘膜佐剂CTA1-DD和融合前构象的F蛋白构成的融合蛋白，命名为CTA1-DD-F，其特征在于，所述的融合蛋白的CTA1-DD-F的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白CTA1-DD-F由SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列编码。

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白CTA1-DD-F由SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列通过大肠杆菌表达系统表达、纯化后获得。

4.一种制备如权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)融合蛋白CTA1-DD-F由粘膜佐剂CTA1-DD和融合前构象的F蛋白构成，CTA1-DD-F基因由CTA1-DD和F基因通过融合PCR获得，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，应用EcoR1和Not1两个酶切位点连在pET28a载体上，得到的表达质粒命名为pET28a-CTA1-DD-F；

(2)构建好的表达质粒pET28a-CTA1-DD-F转化大肠杆菌BL21(DE3)，涂布卡那霉素抗性LB培养基平板，过夜培养，挑取生长良好的单菌落接种于LB液体培养基中，37℃、250rpm振荡培养至对数生长中期(OD₆₀₀0.4～0.8)，向培养物中加入IPTG，使终浓度为1mM，继续培养；

(3)收集大肠杆菌液，离心，弃上清，留沉淀；用纯水重悬沉淀后超声重悬液，收集包涵体沉淀，弃上清，用纯水清洗包涵体三遍；用平衡液溶解包涵体后离心，留上清样品过柱，获得纯化的融合蛋白CTA1-DD-F；其中，所述的平衡液为含有8M尿素，16mM Na₂HPO₄，4mMKH₂PO₄，0.5mM NaCl的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液。

5.权利要求1-3任一项所述的融合蛋白在制备人呼吸道合胞病毒粘膜疫苗中的用途。

6.一种人呼吸道合胞病毒粘膜疫苗，其特征在于，所述的疫苗中含有权利要求1-3任一项所述的由粘膜佐剂CTA1-DD和融合前构象的F蛋白构成的融合蛋白。