[发明专利]一种突变口蹄疫病毒感染性克隆及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术中病毒技术领域，特别涉及一种突变口蹄疫病毒感染性克隆，还涉及此感染性克隆的制备及应用。通过定点突变技术将3C蛋白第51、54、110、159位赖氨酸突变为精氨酸。本发明构建的突变感染性克隆FMDV IC‑K5154110159R，其3C蛋白的SUMO化修饰位点已突变掉，并且该感染性克隆能够增殖，为在病毒水平检测及研究FMDV感染与SUMO化修饰提供强有力的工具。

技术领域

本发明涉及生物技术中病毒技术领域，特别涉及一种突变口蹄疫病毒感染性克隆，还涉及此感染性克隆的制备及应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouse disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mousedisease virus，FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病的暴发流行，给畜牧业生产和人民生活造成了极大的损失，被国际兽医局列为A类动物传染病之首。FMDV属于微RNA病毒科、口蹄疫病毒属，基因组为单股正股RNA，全长约8500bp，由5’端非编码区(UTR)、一个大的开放阅读框(ORF)和3’端非编码区(UTR)组成。ORF编码一个大的多聚蛋白，由病毒编码的蛋白酶切割(L^pro，2A和3C^pro)，经过一系列裂解，形成前体和成熟的结构蛋白及非结构蛋白。

Small Ubiquitin-like Modifier(SUMO)小泛素样修饰，是近些年来发现的一种与泛素化修饰具有相似酶促反应过程的翻译后修饰。SUMO化修饰具有多种生物学功能，例如维持基因组稳定性、调控转录因子活性、介导蛋白质之间的相互作用、调节蛋白质在细胞内的定位或稳定性、参与信号转导以及DNA损伤修复等。对病毒而言，很多病毒的蛋白可以被SUMO化修饰，在病毒感染的过程中发挥重要的调控作用。

目前关于SUMO化修饰在FMDV感染过程中的作用未见任何报道。

发明内容

为了进一步在病毒水平鉴定3C蛋白的SUMO化修饰位点及3C蛋白的SUMO化修饰对病毒增殖等的影响，十分有必要构建一株FMDV 3C蛋白SUMO化修饰位点突变体感染性克隆，该感染性克隆将会是分子水平研究FMDV与宿主之间的相互作用、揭示机体抗病毒机制过程中非常重要的工具。

本发明提供了一种突变口蹄疫病毒感染性克隆，还涉及此感染性克隆的制备及应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

一株3C蛋白SUMO化修饰位点突变的FMDV感染性克隆是通过以下步骤得到的：

根据O型FMDV Tibet/CHA/99株(GenBank登录号：AJ539138)自身携带酶切位点将碱基序列分为A、B、C三段，通过RT-PCR扩增获得A、B、C三个片段，将A、B、C三个片段依次克隆入pBluescript II SK+载体构建有O型FMDV Tibet/CHA/99株全长cDNA的质粒pSK-AmBC，然后通过定点突变技术将3C蛋白第51、54、110、159位赖氨酸突变为精氨酸构建FMDV ICK5154110159R。将PacI酶线性化后的pSK-AmBC片段为模板体外转录后转染BHK-21细胞获得。