[发明专利]一种蛹虫草活性蛋白CMPr及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种蛹虫草活性蛋白CMPr及其制备方法与应用，其中，所述制备方法包括以下步骤：步骤S10、用PBS缓冲液溶解蛹虫草子实体总蛋白，使蛋白浓度为15～20mg/mL；步骤S20、取2～3mL蛹虫草子实体总蛋白溶液，过滤后上样到分子筛Sephadex G‑50层析柱，用PBS缓冲液洗脱，获取第一洗脱图谱；步骤S30、根据所述第一洗脱图谱，收集含有蛹虫草活性蛋白CMPr的组分；步骤S40、将所述含有蛹虫草活性蛋白CMPr的组分浓缩至蛋白浓度为15‑20mg/mL；步骤S50、取2～3mL浓缩溶液上样到Superdex 75凝胶层析柱中，用PBS缓冲液洗脱，获取第二洗脱图谱，并根据所述第二洗脱图谱收集纯的蛹虫草活性蛋白CMPr。本发明旨在从蛹虫草子实体中分离出一种具有免疫激活活性的单一蛋白CMPr。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种蛹虫草活性蛋白CMPr及其制备方法与应用。

背景技术

蛹虫草属于子囊菌门、肉座目、麦角菌科、虫草属的一类可食药两用的大型真菌。蛹虫草活性成分与药理作用被报道与中国传统名贵中草药冬虫夏草相似，并且蛹虫草已实现规模化人工种植，因此现已作为冬虫夏草的理想替代品，在食品以及中药等领域被广泛使用。大量科学研究论证，蛹虫草含有多种活性成分，如虫草酸、虫草素、虫草多糖等，这些活性成分使蛹虫草表现出抗肿瘤、抵抗炎症以及增强免疫等药理活性。因此，蛹虫草不仅可作为食用菌具有较高的营养价值，而且在保健品和药物中有广泛应用。有大量研究报导表明，蛹虫草子实体的一些活性成分具有增强免疫的药理效果。但目前对具有免疫增强活性的蛹虫草成分的研究主要集中在虫草素以及虫草多糖上，蛋白作为蛹虫草子实体的重要组成成分，其分离和活性却鲜有报道。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种蛹虫草活性蛋白CMPr及其制备方法与应用，旨在从蛹虫草子实体中分离出一种具有免疫激活活性的单一蛋白CMPr。

为实现上述目的，本发明提出一种蛹虫草活性蛋白CMPr的制备方法，所述蛹虫草活性蛋白CMPr的制备方法包括以下步骤：

步骤S10、用PBS缓冲液溶解蛹虫草子实体总蛋白，使蛋白浓度为15～20mg/mL；

步骤S20、取2～3mL蛹虫草子实体总蛋白溶液，过滤后上样到分子筛Sephadex G-50层析柱，用PBS缓冲液洗脱，获取第一洗脱图谱；

步骤S30、根据所述第一洗脱图谱，收集含有蛹虫草活性蛋白CMPr的组分；

步骤S40、将所述含有蛹虫草活性蛋白CMPr的组分浓缩至蛋白浓度为15-20mg/mL；

步骤S50、取2～3mL浓缩溶液上样到Superdex 75凝胶层析柱中，用PBS缓冲液洗脱，获取第二洗脱图谱，并根据所述第二洗脱图谱收集纯的蛹虫草活性蛋白CMPr。

可选地，PBS的pH为7.2～7.5，浓度为8～10mM；PBS中氯化钠的浓度为130～150mM。

可选地，所述步骤S20中，所述第一洗脱图谱中，纵坐标为280nm吸收峰，横坐标为洗脱时间；

所述上样的流速为0.3～0.5mL/min。

可选地，所述步骤S40中，所述浓缩采用截留分子量为3～3.5kDa的超滤管。

可选地，所述步骤S50中，所述第二洗脱图谱中，纵坐标为280nm吸收峰，横坐标为洗脱时间；

所述上样的流速为0.5～0.8mL/min。

可选地，所述步骤S10之前还包括以下步骤：

步骤S100、将蛹虫草子实体磨粉后，加水搅拌均匀，0～4℃静置10～15h后，离心收集上清液，得蛹虫草子实体水溶性提取物；