[发明专利]基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用

说明书

基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用，涉及环境污染检测和免疫学领域，公开了一种基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原(Vitellongenin,VTG)，利用重组蛋白作为抗原制备多克隆抗体。建立检测VTG快速准确的免疫检测方法。利用该方法检测被17‑β雌二醇(E2)诱导的雄性青鳉鱼，发现被E2诱导的雄鱼VTG水平比未诱导雄鱼VTG水平明显升高，利用该方法鉴定雌雄鱼发现雌鱼体内VTG明显高于雄鱼。差异极显著，该技术可以用于环境雌激素污染的监测和雌雄鱼的鉴别。

技术领域

本发明属于环境污染检测和免疫学领域，特别涉及一种基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用。

背景技术

随着工业技术的发展，尤其是化学合成技术的突飞猛进，各种化学合成产品在人类生活中得到大量使用，而且这些化学物质在自然条件下很难降解。其中一类化学物质通过水，气，土壤进入环境，其化学性质与动物激素有相似的功能，进入生物体后能够与正常激素进行竞争，从而打乱人体正常生理功能，甚至造成性发育，性比混乱，有的则可能引起癌变。目前公认的环境雌激素主要包括：农药类物质，主要的具有雌激素活性的农药,除了硫丹、乙基对硫磷以及马拉硫磷等少数几种外，大部分是有机氯农药；添加剂，主要有食品添加剂、塑料制品添加剂(存在于塑料食品器具中尤甚)；二恶英(dioxin)、多氯联苯(PCBs)类:二恶英是人类生产活动产生的副产品,多氯联苯(PCBs)是由209种同类物组成的一组氯代芳烃化合物,具有潜在的致癌生物效应。多氯联苯曾经普遍用在工业和生活上，比如广泛用于电容器和变压器中的绝缘油、耐火增塑剂和液压油，以及润滑剂、密封剂、油漆涂料的添加剂、染料、杀虫剂等的生产，这种物质进入食物链后，多存积在动物脂肪中。多环芳烃(PAHs)也是典型的有机污染物，主要产生于有机物的不完全燃烧过程,在石油产品以及木材处理过程中的化学混合物中都含有这类物质。许多证据显示它可诱发啮齿类动物乳腺肿瘤的发生。人工合成的雌激素主要有雌二醇(E2),已烯雌酚(DES),以及一些口服避孕药等。除了有可能导致性别改变，上述环境雌激素均有三致作用，致癌致畸致突变。因此，开展有效快速检测水体环境环境激素的检测对于及时采取有效措施进行干预制止对于避免环境激素危害生物及人体健康至关重要。目前关于环境激素的检测主要有物理化学方法，这类方法主要能够快速定量定性检测到某种化学物质，但是该类方法往往需要特殊昂贵的仪器设备，试剂以及专业的人员，样品往往需要特殊的前处理，处理检测时间长，费用高。此外，所检测到的往往是某种化学物质的浓度，环境因素的影响常常往往比较复杂，很少只有一类物质其作用，有时是几种物质共同作用的结果，这中间就包括几种物质协调促进作用，也有相互拮抗作用。所以检测到一种物质不能够反应对生物的综合作用，所以，应用生物监测的方法则能够比较客观反应环境对生物的综合影响。目前采用生物标记物的形式监测环境污染是一个重要的趋势。卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是一种卵生生物雌性个体在生殖期间由肝细胞在雌激素诱导下表达后通过血淋巴进入卵巢，入卵后加工成为卵黄蛋白，主要用于卵子的后期发育提供营养。以鱼类为例，雄鱼体内和雌雄幼体一般没有或很少存在VTG，但它们的肝脏存在这个基因，因此，在雌激素或者类似物的诱导下能够诱导产生VTG进入血液，由于雄鱼没有卵巢，因此无法对血液中的VTG进行灭活，因此，雄鱼体内一直存在着比较高水平的VTG，通过检测雄鱼体内的VTG就可以间接反应所生存的水体环境是否收到环境激素的污染。