[发明专利]能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法

说明书

本发明属于蚊虫防治技术领域，公开了一种能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂及使用方法，能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂是球形芽孢杆菌，能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的亚致死剂量为0.0162±0.0014mg/l。本发明发现亚致死剂量球形芽孢杆菌处理斯氏按蚊四龄幼虫可导致存活蚊虫的传疟能力增强；发现亚致死剂量球形芽孢杆菌可能通过改变蚊肠道菌群组成和下调蚊天然免疫抗疟关键分子的表达导致疟疾传播能力增强。本发明有助于明确亚致死剂量球形芽孢杆菌的使用对按蚊传疟能力的影响，指导球形芽孢杆菌的合理应用和制定相应对策，为通过媒介防治阻断疟疾传播奠定基础。

技术领域

本发明属于蚊虫防治技术领域，尤其涉及一种能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂及使用方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus,Bs)是一种在自然界中广泛分布、形成亚末端膨大孢子囊和球形芽孢的好气芽孢杆菌。作为主要生物杀虫剂之一Bs常用于蚊虫防治，其作用机制是通过Bs在蚊幼虫肠道内产生Mtx和Bin等毒性蛋白而损伤蚊肠上皮细胞。尽管Bs在蚊虫防治中的应用越来越广泛，然而相关应用基础研究还远远不够。比如，在实际应用中经常有使用不规范(如剂量选择不合适)和药效随时间下降而未及时补药等情况，导致对蚊幼虫的杀伤作用减弱，部分蚊虫在用药后存活，这不仅会造成在人为选择压力下加速耐药性的出现，也可能造成存活蚊虫的传病能力改变从而对蚊传疾病的流行带来负面影响。

综上所述，现有技术存在的问题是：

球形芽孢杆菌的不合理应用可能导致人为Bs亚致死剂量现象的出现和部分蚊虫在用药后存活，由此可能加速耐药性的出现和改变存活蚊虫的传病能力。

解决上述技术问题的难度：

不同蚊虫对生物杀虫剂Bs的敏感性存在差异，而针对具体蚊种的合理使用剂量缺乏可参考的实验依据，且对不合理使用中出现的亚致死剂量效果造成的后果和相关分子机制认识不足。

解决上述技术问题的意义：

通过研究明确Bs的合理使用剂量和阐明亚致死剂量Bs对存活蚊虫传病能力的影响及其分子机制，可为蚊虫防治中Bs的科学合理应用提供参考，从而提高蚊幼虫的杀伤率并避免按蚊传病能力增强的风险。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种防治斯氏按蚊中能够导致其传疟能力增强的生物杀虫剂使用方法及其分子机制。

本发明是这样实现的，一种避免斯氏按蚊亚致死剂量存在和发生实验方法，所述实验方法包括：

第一步，Bs对斯氏按蚊四龄幼虫杀伤效果的检测

实验条件为：室温28℃左右，相对湿度为80％，每日日光灯照明12h；

在6个搪瓷盘中分别加入1L去氯自来水及100条斯氏按蚊四龄幼虫；

配制Bs悬浊液，分别加入上述6个搪瓷盘中，使各盘中Bs终浓度呈递增分布，并依次做好标记；

加药后每天记录各盘中的幼虫死亡数；

每个浓度重复3次试验；

利用Probit analysis生物测定方法，获得Bs杀伤斯氏按蚊四龄幼虫的亚致死剂量0.0162±0.0014mg/l；

第二步，亚致死剂量Bs处理后存活的按蚊对传疟能力的影响

实验条件同所述第一步，利用亚致死剂量0.0162±0.0014mg/l Bs处理1000条斯氏按蚊四龄幼虫，作为Bs组，同时设置不加药的对照组；

48h后，收集各组活蛹于碗中，并放入蚊笼内进行饲养；