[发明专利]能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法

权利要求书

1.一种能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法，其特征在于，所述能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法包括避免斯氏按蚊亚致死剂量存在和发生实验方法；

所述避免斯氏按蚊亚致死剂量存在和发生实验方法具体包括：

第一步，球形芽孢杆菌对斯氏按蚊四龄幼虫杀伤效果的检测：

实验条件为：室温28℃，相对湿度为80％，每日日光灯照明12h；

在6个搪瓷盘中分别加入1L去氯自来水及100条斯氏按蚊四龄幼虫；

配制球形芽孢杆菌悬浊液，分别加入上述6个搪瓷盘中，使各盘中球形芽孢杆菌终浓度呈递增分布，并依次做好标记；

加药后每天记录各盘中的幼虫死亡数；

每个浓度重复3次试验；

利用Probitanalysis生物测定方法，获得球形芽孢杆菌杀伤斯氏按蚊四龄幼虫的亚致死剂量0.0162±0.0014mg/l；

第二步，亚致死剂量球形芽孢杆菌处理对存活按蚊传疟能力的影响分析：

利用亚致死剂量0.0162±0.0014mg/l球形芽孢杆菌处理1000条斯氏按蚊四龄幼虫，作为Bs组，同时设置不加药的对照组；

48h后，收集各组活蛹于碗中，并放入蚊笼内进行饲养；

在液氮中取出冻存的约氏疟原虫BY265荧光株，注射入2只昆明小鼠的腹腔，3d后进行传代；

传代小鼠原虫血症达到8-10％后，用于饲喂按蚊；

3-5天龄按蚊饥饿处理8-12h后，用感染BY265的小鼠进行饲血，饲血时间为1-2小时；

饲血后9-11天解剖蚊胃，观察卵囊情况，包括感染疟原虫的蚊虫数及每个蚊胃上的卵囊数；

第三步，球形芽孢杆菌对斯氏按蚊传疟能力影响的分子机制：

利用亚致死剂量球形芽孢杆菌处理斯氏按蚊四龄幼虫，收集存活按蚊饲养至3天龄成蚊；同时，设同龄未处理按蚊为对照组；

进行约氏疟原虫攻击感染；

于吸血感染前后不同时间点，提取斯氏按蚊总RNA，反转录合成cDNA，通过转录组测序；

利用Real-timePCR技术进行验证；

于吸血感染前后不同时间点，解剖蚊肠道，提取基因组DNA，利用高通量测序技术分析Bs处理组和对照组间蚊肠道菌群的差异；

所述能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法中的球形芽孢杆菌应避免使用亚致死剂量0.0162±0.0014mg/l。

2.如权利要求1所述的能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法，其特征在于，所述能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法具体包括：

第一步，在去氯自来水中放入斯氏按蚊四龄幼虫；

第二步，按照设定的亚致死剂量浓度加入球形芽孢杆菌，轻柔混匀；

第三步，观察数天并收集存活按蚊幼虫；

第四步，随后蚊幼虫进一步蛹化并羽化成成蚊；该存活按蚊成蚊传疟能力可增强。

3.如权利要求2所述的能够导致斯氏按蚊传疟能力增强的生物杀虫剂的使用方法，其特征在于，所述第一步中在1L去氯自来水中放入100条斯氏按蚊四龄幼虫。