[发明专利]检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法

说明书

本发明公开了检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法，属于基因工程以及遗传育种技术领域。与传统的基于4P‑ARMS‑PCR、PCR‑RFLP、PCR‑SSCP以及Sanger测序检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法相比，本发明的方法基于特异性引物对以及高分辨率熔解曲线分析，这使得本发明的方法仅需通过一次PCR，无需酶切或者测序等手段，即可将绵羊MSTN基因g.+6723位点的三种基因型AA、AG和GG进行分型，检测效率极高且操作简便。

技术领域

本发明涉及检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法，属于基因工程以及遗传育种技术领域。

背景技术

绵羊肌肉的产量和质量决定了绵羊品种的肉用性能。肉用绵羊产肉性能的好坏，除与营养和饲养管理等因素有关外，还与遗传因素密切相关，即受绵羊体内与肌肉生长发育相关的基因的调控。

肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN），也称生长分化因子8（differentiationfactor 8，GDF8），属于转化生长因子超家族成员，是肌肉生长的负调控因子（具体可见参考文献：McPherron, A.C. and S. Lee, Double Muscling in Cattle Due to Mutationsin the Myostatin Gene. Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America, 1997. 94(23): p. 12457-12461.）。该基因的突变失活，能阻断MSTN对肌细胞增殖生长的抑制作用，引起广泛的肌肉增殖并显著降低脂肪的沉积（具体可见参考文献：Grobet, L., et al., Molecular definition of an allelic seriesof mutations disrupting the myostatin function and causing double-muscling incattle. Mammalian Genome, 1998. 9(3): p. 210-213.）。

2006年，Clop等报道了在德克赛尔羊MSTN基因3’UTR区的g.+6723G A突变，该突变的出现使得该处的寡核苷酸序列成为肌肉细胞中高表达的两个microRNA，即mir1和mir206的结合位点，从而影响了MSTN基因mRNA的翻译，出现类似“双肌”的表型（具体可见参考文献：Clop, A., et al., A mutation creating a potential illegitimatemicroRNA target site in the myostatin gene affects muscularity in sheep.Nature Genetics, 2006. 38(7): p. 813-818.）。有研究表明，MSTN基因g.+6723位点G A纯合突变的绵羊（AA）与野生型（GG）相比，胴体重和肌肉重均显著增加，且脂肪沉积减少（具体可见参考文献：Haynes, F.E.M., et al., Lack of association between allelicstatus and myostatin content in lambs with the myostatin g+6723G A allele1.Journal of Animal Science, 2013. 91(1): p. 78-89.）。另有研究表明，携带该突变的杂交绵羊（AG）比不携带该突变的绵羊（GG）具有更高的屠宰率和肌肉质量（具体可见参考文献：Hope, M., et al., The effects of the myostatin g+6723GA mutation oncarcass and meat quality of lamb. Meat Science, 2013. 95(1): p. 118-122.）。因此，筛选携带MSTN基因g.+6723位点G A突变的绵羊对培育高产肉用绵羊新品系（种）十分重要。