[发明专利]检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法有效
申请号: | 201911049492.2 | 申请日: | 2019-10-31 |
公开(公告)号: | CN110628919B | 公开(公告)日: | 2022-04-29 |
发明(设计)人: | 郑重;张立;李光鹏;张晓然;张功 | 申请(专利权)人: | 内蒙古大学;蒙天然牧业科技发展有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 林娟 |
地址: | 010000 内蒙古自*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 绵羊 mstn 基因 6723 基因型 方法 | ||
1.一组可用于检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的引物对,其特征在于,所述引物对中,上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示,下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
2.一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述方法为以已知MSTN基因g.+6723位点基因型的绵羊的基因组DNA作为内标,先使用权利要求1所述的引物对对MSTN基因g.+6723位点的基因型为AA的绵羊的基因组DNA、MSTN基因g.+6723位点的基因型为AG的绵羊的基因组DNA、MSTN基因g.+6723位点的基因型为GG的绵羊的基因组DNA以及待测绵羊的基因组DNA进行扩增,然后对扩增产物进行高分辨率熔解曲线分析,最后根据待测绵羊的基因组DNA扩增获得的高分辨率熔解曲线与MSTN基因g.+6723位点的基因型为AA的绵羊的基因组DNA、MSTN基因g.+6723位点的基因型为AG的绵羊的基因组DNA以及MSTN基因g.+6723位点的基因型为GG的绵羊的基因组DNA扩增获得的高分辨率熔解曲线判断待测绵羊MSTN基因g.+6723位点的基因型。
3.如权利要求2所述的一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述扩增以及高分辨率熔解曲线分析均在实时荧光定量PCR仪上进行。
4.如权利要求3所述的一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述高分辨率熔解曲线由实时荧光定量PCR仪配套软件的Gene Scanning模块自动生成;所述判断的程序为:先在实时荧光定量PCR仪配套软件的gene scanning模块中将MSTN基因g.+6723位点的基因型为AA的绵羊的基因组DNA、MSTN基因g.+6723位点的基因型为AG的绵羊的基因组DNA以及MSTN基因g.+6723位点的基因型为GG的绵羊的基因组DNA设为stand样,并且,标注基因型,然后对扩增产物进行高分辨率熔解曲线分析,最后genescanning模块会自动以stand样为判断基准,根据位移曲线判断待测绵羊的基因型。
5.如权利要求2-4任一所述的一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述扩增的反应体系为20 μL,含有5 ng待测绵羊的基因组DNA、10μL 2× MasterMix、4.0 mmol/L MgCl2以及0.1 μM权利要求1所述的引物对。
6.如权利要求2所述的一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述扩增的程序为:先95℃预变性10 min,然后95℃变性15 s、57℃退火20 s、72℃延伸20 s的过程进行45个循环。
7.如权利要求2所述的一种检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法,其特征在于,所述高分辨率熔解曲线分析的程序为:扩增的程序结束后,先95℃变性1 min,然后40℃退火1 min,再从65℃连续升温至95℃,最后降温至40℃;连续升温的速率为1℃/s;连续升温期间,每秒采集荧光信号25次。
8.一种可用于检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的产品,其特征在于,所述产品含有权利要求1所述的引物对。
9.如权利要求8所述的一种可用于检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的产品,其特征在于,所述产品为检测试剂或检测试剂盒。
10.权利要求1所述的引物对或权利要求2-7所述的方法或权利要求8或9所述的产品在检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型中的应用。
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