[发明专利]一种提高细胞抗体表达量的方法有效
| 申请号： | 201911038650.4 | 申请日： | 2019-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN110669791B | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 张志新;卓越;周阿芳 | 申请（专利权）人： | 成都益安博生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/86 | 分类号： | C12N15/86;C12N15/90;C12N15/52 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 李亚男 |
| 地址： | 610041 四川省成都*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 细胞 抗体 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种提高细胞抗体表达量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）设计gRNA，具体序列如下：
gRNA-F：CACCGCAATCGACAGCTAGCCAACA；
gRNA-R：AAACTGTTGGCTAGCTGTCGATTGC；
（2）将退火后的gRNA与质粒连接，并对连接后的质粒进行克隆保存；
（3）采用步骤（2）所得质粒进行病毒包装，然后再对细胞进行病毒转染，培养5~7天后，筛选得到TRIM21蛋白敲除的单克隆细胞株，最后得到TRIM21蛋白敲除且S12P2D4抗体表达量提升的哺乳动物细胞系。
2.根据权利要求1所述的提高细胞抗体表达量的方法，其特征在于，步骤（2）中所述gRNA的退火过程为：
gRNA-F和gRNA-R引物各取1µL，加水溶解至浓度为100µM，再补充8µL ddH2O，于95℃保持10min，然后以5℃/min退火至25℃。
3.根据权利要求1所述的提高细胞抗体表达量的方法，其特征在于，步骤（2）中所述gRNA与质粒的连接体系为：1µL T4连接酶、1µL退火后的gRNA、1µL 10×Ligase Buffer、50ng LentiCRISPRv2-puro，最后用ddH2O补足至11µL。
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