[发明专利]多糖结合疫苗中残余NaCNBH3的离子色谱检测方法

说明书

氰基硼氢化钠（NaCNBH₃）能够还原多糖经高碘酸钠氧化形成的醛基与蛋白的氨基形成C=N双键，促进糖与蛋白的结合，从而被用于多糖结合疫苗的制备工艺中；本发明提供一种多糖结合疫苗中残余NaCNBH₃的离子色谱‑脉冲安培检测方法，包括步骤：用NaCNBH₃标准品配制对照品溶液；将待检样品用超滤离心管进行离心，收取滤过液用0.45μm膜过滤作为供试品溶液；供试品溶液和对照品溶液NaCNBH₃分别上样于离子色谱柱，上样后进行洗脱，记录色谱图；根据对照品溶液NaCNBH₃浓度及其色谱峰面积，供试品溶液NaCNBH₃色谱峰面积，采用外标法计算试样中NaCNBH₃的浓度。本发明方法简单、操作方便、精确度高，可准确、快速实现多糖结合疫苗中残余NaCNBH₃的有效监控。

技术领域

本发明属于测试分析领域，具体为一种利用离子色谱-脉冲安培测定NaCNBH₃的方法。

背景技术

多糖结合疫苗是通过化学方法将多糖抗原与载体蛋白共价结合，抗原类型从胸腺非依赖性抗原转变为胸腺依赖性抗原，能激发2岁以下儿童、老年人和免疫缺陷者体内产生有效的免疫应答，并产生免疫记忆，诱导产生的保护性抗体主要为IgG抗体，比多糖疫苗诱导产生的IgM更有效，且能维持较长时间，具有多糖疫苗不可比拟的优势。在多糖结合疫苗的制备工艺中，荚膜多糖经高碘酸钠氧化形成的醛基与蛋白的氨基形成C=N双键，在催化剂氰基硼氢化钠的条件下，C=N双键被还原成稳定单键，从而促进了结合反应的右移。因此，氰基硼氢化钠（NaCNBH₃）被广泛的应用在多糖结合疫苗的制造领域。由于该物质含有氰基，具有一定的毒性，故需要对结合疫苗中残余NaCNBH₃进行有效监控，准确测定多糖结合原液疫苗中NaCNBH₃的残留量对疫苗产品质量控制具有重要意义。

目前，国内采用紫外可见分光光度法（UV）和酶标法，来测定花粉蛋白注射液NaCNBH₃的含量，此法反应时间长（5h），条件复杂，灵敏度低，且目前国内无相关文献报道多糖结合疫苗中NaCNBH₃残留量的测定方法，因此如何对多糖结合疫苗中痕量NaCNBH₃残留进行准确测定仍是一个技术难点。

发明内容

本发明的目的是提供一种多糖结合疫苗中残余NaCNBH₃离子色谱-脉冲安培的检测方法。通过该方法，可准确、快速实现多糖结合疫苗中残余NaCNBH₃的有效监控。

本发明所述的多糖结合疫苗中残余NaCNBH₃离子色谱-脉冲安培测定方法，包括如下步骤：

(1)用NaCNBH₃标准品配制不同浓度的对照品溶液；

(2)待检样品用超滤离心管进行离心，收取滤过液用0.45μm膜过滤作为供试品溶液；

(3)供试品溶液和对照品溶液NaCNBH₃分别上样于离子色谱柱，上样后进行洗脱，记录色谱图；

(4)以对照NaCNBH₃溶液的系列浓度对其相应的色谱峰面积作直线回归，

将供试品溶液的NaCNBH₃色谱峰面积代入直线回归方程，求出其相应浓度。

本发明的有益效果如下：