[发明专利]基于SERS检测鸡蛋中四环素类抗生素残留的方法

权利要求书

1.基于SERS检测鸡蛋中四环素类抗生素残留的方法，所述的四环素类抗生素包括土霉素、四环素或金霉素，其特征在于，包括以下步骤：

（1）活性增强基底的制备

采用传统的微波加热方法制备银纳米溶胶颗粒，即在微波加热条件下，利用柠檬酸三钠还原硝酸银制备银溶胶，反应一段时间后，当银纳米溶胶的颜色由红色变为灰绿色时，停止加热并将银纳米溶胶取出，自然冷却至室温，于4℃保存备用；吸取10μL银纳米溶胶均匀附于丝网印刷电极的碳工作电极上，烘箱内60℃烘干，重复镀制三次，制成0.5 cm×0.5 cm银纳米镀膜作为 SERS 活性增强基底；

（2）鸡蛋提取液样品的制备

取鸡蛋破壳，置于均质机内充分作用均匀，取5g均匀蛋液置于50mL离心管内，再加入5g无水硫酸钠和10mL丙酮，涡旋3min，超声10min，5000r/min离心5min，取上清液得鸡蛋提取液样品；

（3）静电富集和拉曼光谱检测

将步骤（1）制成的活性增强基底置入步骤（2）得到的鸡蛋提取液样品，对丝网印刷电极施加电压，所述的施压频率为30次/秒，使得抗生素分子富集和吸附在丝网印刷电极的表面，置于拉曼光谱样品池中，调节拉曼光谱仪器的参数设置，获得SERS光谱；

所述的拉曼光谱仪器的参数设置如下：光谱仪激光功率2mW，激光波长785nm，扫描光谱范围100-3200 cm^-1 ，选择波段为150-1800cm^-1，信号相对强度范围为4000-25000，积分时间10s，积分平均2次；对测量数据进行记录待分析；

（4）含有四环素类抗生素的丙酮溶液的SERS检测

制作工作标曲，分别使用标准溶液制备成土霉素、四环素、金霉素标准溶液0.2、0.4、0.8、1.2、2.0mg/L浓度点，拉曼光谱仪器的参数设置同步骤（3）；

通过对比不含四环素类的丙酮鸡蛋提取液、含有抗生素的丙酮提取液的不同浓度的工作标曲点，找出拉曼特最佳征峰位置，作为定量峰，根据四环素化学结构，选取同时具备拉曼光谱720、1178、1278、1357、1450、1560cm^-1为目标化合物四环素；同时具备拉曼光谱882、1271、1328、1437、1583cm^-1为目标化合物土霉素；同时具备拉曼光谱996、1116、1190、1312、1434、1578cm^-1为目标化合物金霉素；处理荧光背景，进行六峰积分和绘制工作曲线，积分绘制工作曲线，横坐标和纵坐标分别为样品标液浓度和拉曼特征峰的峰强，最终选取1278cm^-1、1271cm^-1、1116cm^-1为定量峰强度， 曲线回归方程分别为Y=247X+76、Y=349X+10、 Y=289X+3.5，线性相关系数0.95、0.84、0.86，利用得到的标准曲线对质量为0.80mg/L的四环素空白加标样品进行检测，得到值为0.63mg/L、0.61mg/L、0.60mg/L，回收率为78.8%、76.3%、75.0%。

2.根据权利要求1所述的基于SERS检测鸡蛋中四环素类抗生素残留的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的银纳米溶胶自然冷却至室温后需要清洗后再于4℃保存备用；所述的清洗是用乙醇5000r/min离心清洗至少3遍。

3.根据权利要求1所述的基于SERS检测鸡蛋中四环素类抗生素残留的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的处理荧光背景是采用光谱处理数据分析软件Labspec处理荧光背景。