[发明专利]反应液、PCR反应液及其使用方法和用途

说明书

本发明提供一种反应液、PCR反应液及其使用方法和用途。反应液，包括反应液A，所述反应液A包括Tris‑HCl 5‑15mmol/L、Tth酶10‑30U/mL、UNG酶1‑3U/mL、Mnsupgt;2+/supgt;40‑100mmol/L和甘油20％‑70％V甘油/V反应液A。PCR反应液，包括反应液A和反应液B。PCR反应液的使用方法：将反应液A、反应液B分别加入提取到的核酸中进行PCR反应，然后测试即可。PCR反应液的用途，用于血液筛查HIV、HBV和HCV。本申请提供的反应液，酶稳定性好，保存时间长；本申请提供的PCR反应液，能抵抗高温对酶活性的影响，有效的防止污染，具有高效率、高稳定性的突出特点。

技术领域

本发明涉及PCR反应领域，尤其涉及一种反应液、PCR反应液及其使用方法和用途。

背景技术

PCR(聚合酶链式反应)是现代分子生物学中的基础之一，目前已经普遍运用在分子诊断层面。对血液进行鉴定，建库，筛查等也离不开PCR。

RT-PCR技术(实时荧光定量PCR技术)是普通PCR技术的衍生，具有更好的扩增特异性以及更高的检测灵敏度，将RT-PCR技术和血液筛查技术结合起来，将更好的提高样本检测的效率，提高血液检测的灵敏度，以及HCV、HBV、HIV的发现概率，降低风险。使用PCR进行血液筛查方面的检测将提高血液的安全性。

PCR反应液的配置会极大的影响PCR反应的质量和效率，例如反应液中酶的稳定性、Mg²⁺影响反应的特异性和扩增片段的产率、PCR反应的效率及稳定性等问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种反应液、PCR反应液及其使用方法和用途，以解决上述问题。

为实现以上目的，本发明特采用以下技术方案：

一种反应液，包括反应液A，所述反应液A包括Tris-HCl 5-15mmol/L、Tth酶10-30U/mL、UNG酶1-3U/mL、Mn²⁺40-100mmol/L和甘油20％-70％V_甘油/V_反应液A。

缓冲液Tris-HCl和甘油的配合使用，可以有效提高酶的稳定性，延长保存时间。

优选地，所述Tris-HCl的浓度为10mmol/L、pH为7-9，所述Tth酶的浓度为20U/mL，所述UNG酶的浓度为2U/mL，所述Mn²⁺的浓度为60mmol/L，所述甘油的体积百分比为50％；

优选地，所述Tris-HCl的pH为7.5；

优选地，所述Mn²⁺对应的物质为醋酸锰。