[发明专利]反应液、PCR反应液及其使用方法和用途有效
申请号: | 201911033331.4 | 申请日: | 2019-10-28 |
公开(公告)号: | CN110628885B | 公开(公告)日: | 2023-04-25 |
发明(设计)人: | 勾宏娜;储迅涛;林艳;邓京;叶槟源 | 申请(专利权)人: | 珠海丽珠试剂股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686;C12Q1/70 |
代理公司: | 北京超成律师事务所 11646 | 代理人: | 唐宁 |
地址: | 519000 广东省珠海市香*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 反应 pcr 及其 使用方法 用途 | ||
1.一种PCR反应液,其特征在于,包括反应液A和反应液B;
所述反应液A由Tris-HCl 10mmol/L、Tth酶20U/mL、UNG酶2U/mL、Mn2+ 60mmol/L和甘油50% V甘油/V反应液A组成;所述Tris-HCl的pH为7.5;
所述反应液B由缓冲液、DATP4mol/mL、DGTP 4 mol /mL、DCTP 4 mol /mL、DUTP 8 mol/mL、DTT 1mmol/L、BSA 0.1mmol/L和Mn2+ 60mmol/L组成;以所述反应液B的总体积计,所述缓冲液由bicine/KOH 50mmol/L、K-acetate 115mmol/L和甘油8%V甘油/V反应液B组成;所述缓冲液的pH为8.2;
使用时,所述反应液A与所述反应液B的体积比为3:27。
2.根据权利要求1所述的PCR反应液,其特征在于,所述Mn2+对应的物质为醋酸锰。
3.根据权利要求1所述的PCR反应液,其特征在于,还包括矿物油,所述矿物油与所述反应液A的体积比为(10-30):(1-5)。
4.根据权利要求3所述的PCR反应液,其特征在于,所述矿物油包括石蜡油。
5.根据权利要求4所述的PCR反应液,其特征在于,所述反应液A、所述反应液B、所述石蜡油的体积比为3:27:20。
6.根据权利要求1~5任一项所述的PCR反应液,其特征在于,所述反应液A和所述反应液B的溶剂均为水。
7.一种权利要求1~6任一项所述的PCR反应液的非疾病诊断和治疗目的的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:
将所述反应液A、所述反应液B分别加入核酸中进行PCR反应即可。
8.根据权利要求7所述的使用方法,其特征在于,所述PCR反应的变性温度为87-93℃、退火温度为55-61℃、延伸温度为52-58℃;循环次数为40-50次。
9.一种权利要求1~6任一项所述的PCR反应液的用途,其特征在于,用于制备血液筛查HIV、HBV和HCV的产品。
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