[发明专利]一种表达质粒、用于包装容量增加的二代腺病毒的细胞株及其应用有效
| 申请号： | 201911033247.2 | 申请日： | 2019-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN110656090B | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 陈平;李娜;王暄;沈亚钕 | 申请（专利权）人： | 嘉兴安宇生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85 |
| 代理公司： | 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向庆宁 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 质粒 用于 包装 容量 增加 二代 病毒 细胞株 及其 应用 | ||
1.一种表达质粒用于制备包装缺失E2a-DBP基因和E4基因的二代腺病毒的细胞株的用途，其特征在于，所述表达质粒包含编码腺病毒E2a-DBP蛋白和E4-ORF6蛋白的核酸序列；所述表达质粒是通过将腺病毒的E2a-DBP基因序列和E4-ORF6基因序列插入真核表达载体的多克隆位点制备而成，其中，所述E2a-DBP基因序列如SEQ ID No.5所示，所述E4-ORF6基因序列如SEQ ID No.6所示；所述真核表达载体为pcDNA3.1；所述表达质粒通过IRES序列串联启动E2a-DBP基因和E4-ORF6基因的表达，其中，IRES序列的基因序列如SEQ ID No.7所示；所述表达质粒的碱基序列如SEQ IDNo.9所示；
所述细胞株的制备方法由如下步骤组成：
1)构建表达质粒：设计引物，扩增E4-ORF6和E2a-DBP序列，添加6his标签序列，E4-ORF6和E2a-DBP通过IRES序列启动翻译，构建基于IRES序列的两个基因共表达质粒pcDNA3.1+（hyg）-ORF6-IRES-DBP-6His；
2)以步骤1)所构建的表达质粒转染表达腺病毒E1蛋白的包装细胞株，筛选获得同时表达E2a-DBP蛋白和E4-ORF6蛋白的阳性细胞株；所述表达腺病毒E1蛋白的包装细胞株为293细胞系、911细胞系或PERC6细胞系；
3)用缺失E2a-DBP基因和E4基因的二代腺病毒载体转染步骤2)所得阳性细胞株，筛选获得用于包装所述缺失E2a-DBP基因和E4基因的二代腺病毒的稳定细胞株。
2.一种包装缺失E2a-DBP基因和E4基因的二代腺病毒的细胞株，所述细胞株的保藏编号为：CCTCC No:C201996。
3.如权利要求2所述的细胞株在用于制备包装容量增加的二代腺病毒中的应用。
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