[发明专利]一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法

说明书

本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法。一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，包括以下步骤：1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测。本申请中采用色谱质谱联用法，色谱能够对目标分析物进行有效的分离，并且质谱的灵敏度更高，能够在更少的样本中得到更准确的结果，而且能够同时检测到TMAO及其相关代谢产物，从而为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的线索。

技术领域

本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法。

背景技术

氧化三甲胺(Trimetlylamine oxide，TMAO)，是水产品中含量相对较多的低分子胺类化合物。在人体中肠道微生物能够代谢胆碱和卵磷脂生成三甲胺进而被代谢成TMAO。氧化三甲胺及代谢物参与多种重要的生物学功能，如渗透压调节、稳定蛋白、参与细胞分裂等。研究表明TMAO水平升高与心血管疾病呈现明显正相关，与高血压、心功能不全、动脉硬化等多种疾病密切相关，氧化三甲胺及相关代谢物的研究在探索TMAO代谢、相关疾病发病机理、诊断、治疗及预防手段等方面均有重要的参考价值。因此，TMAO及其相关代谢产物在血浆中的定量检测方法具有重要的临床价值。

专利CN108507984A中通过酶联免疫法测定生物样本中的TMAO，这也是目前大部分科研人员使用的方法。但是酶联免疫法的主要缺陷是抗体之间的交叉反应导致的方法灵敏度不高。专利CN109917042A虽然也是通过色谱质谱联用的方法，但是只检测了TMAO一种物质，不能同时对TMAO及其相关代谢产物进行检测，方法的全面性不足，进而会影响到检测方法的准确度。

发明内容

为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，包括以下步骤：

1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；

2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；

3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测；

所述液相色谱的流动相A相选自甲酸铵、甲酸铵水溶液、甲酸、甲酸水溶液中的一种或几种。

作为本发明一种优选的技术方案，所述处理后的样本溶液中包括内标混合液。

作为本发明一种优选的技术方案，所述液相色谱的流动相A相为甲酸铵水溶液和甲酸水溶液。

作为本发明一种优选的技术方案，所述液相色谱的流动相B相为乙腈。

作为本发明一种优选的技术方案，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：

0-1min：流动相A为10％→10％，流动相B为90％→90％；

1-6.5min：流动相A为10％→29.5％，流动相B为90％→70.5％；

6.5-8min：流动相A为29.5％→50％，流动相B为70.5％→50％；

8-9.3min：流动相A为50％→50％，流动相B为50％→50％；

9.3-9.5min：流动相A为50％→10％，流动相B为50％→90％；

9.5-13min：流动相A为10％→10％，流动相B为90％→90％。

作为本发明一种优选的技术方案，所述质谱的仪器为三重四极杆质谱仪。