[发明专利]用于遗传性肿瘤胚系突变检测的多重PCR引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了用于遗传性肿瘤胚系突变检测的多重PCR引物组及试剂盒。多重PCR引物组至少包括SEQ ID NO.：1～276所示的引物序列。本发明的多重PCR引物之间无干扰，可以通过一次将引物混合进行多重PCR，扩增出所述要的多种基因，大大减少了PCR的操作量，进而大幅降低了整体的测序成本。在本发明的一些实例中，可以一次扩增出胚系遗传的152个核心CPG致癌基因的全部外显子区域以及常发生突变的内含子区域，包括点突变、小片段缺失和插入等突变类型，极大地方便了后续的高通量测序操作。通过对高通量测序数据进行进一步的解读，可以对待测者的肿瘤发病风险进行评估，使其避免相关的不健康生活方式，降低肿瘤发生风险，并指导个性化健康管理。

技术领域

本发明涉及一种用于遗传性肿瘤胚系突变检测的多重PCR引物组及试剂盒。

背景技术

据估计，人类中约有5％～10％肿瘤是由于致癌基因的种系变异(胚系突变)遗传而发生的。胚系突变又叫生殖细胞突变，通常身上所有细胞都带有突变，具有家族遗传性。发生胚系突变的人群中，发生肿瘤的风险要比普通人群发生肿瘤的风险高数十倍或数百倍。父母双亲中，如果其中一方携带致病基因突变并传给了下一代，其后代与普通人相比的患癌风险将大大增加。

1990年，研究者发现了一种直接与遗传性乳腺癌有关的基因，命名为乳腺癌1号基因(Brest Cancer Susceptibility Gene 1，BRCA1)。1994年，又发现另外一种与乳腺癌有关的基因，称为BRCA2。研究发现，BRCA1/2是两种具有抑制恶性肿瘤发生的基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长等方面有着重要的作用。肿瘤细胞的一个明显特征是能够无限制的复制增殖，而BRCA1等抑癌基因可抑制肿瘤细胞的增殖，促进其凋亡，达到抑癌的效果。此外，大多数肿瘤都表现出染色体的不稳定性，如染色体结构异常、非整倍体及染色体的增加或缺失。DNA损伤修复可以使异常的细胞转化为正常细胞或进入细胞凋亡过程。而BRCA1基因的突变导致BRCA1编码的蛋白质从细胞核进入细胞质中，丧失了与DNA结合的能力，从而失去其正常的抑制增殖、促进凋亡和DNA损伤修复等功能。研究发现，拥有BRCA1基因突变的家族倾向于具有高乳腺癌发生率，通常发生在较年轻时，病人的两侧乳房都患癌几率大，且可能同时患有卵巢癌。

随着分子生物技术蓬勃发展，部分基因突变已被证实为特定癌症的风险因子。其中，比较典型和广为人知的便是BRCA基因突变与乳腺癌和卵巢癌的关系。在过去的研究中，BRCA1和BRCA2基因突变，已被证明与较高的乳腺癌(breast cancer)及卵巢癌(ovariancancer)罹患风险有关。大约5％-10％的乳腺癌病例和10％-18％的卵巢癌病例可归因于胚系BRCA1和BRCA2基因突变。

《自然》中<Realising the Promise of Cancer Predisposition Genes.Naturevolume 505，pages 302–308(16January 2014)>介绍种系突变导致癌症高风险或中度风险增加的基因称为癌症易感性基因(CPG)，超过100个致癌CPG已被确定，在许多领域提供了重要的科学解释，特别是癌症病因机制。

《新英格兰医学杂志》中<Germline Mutations in Predisposition Genes inPediatric Cancer.NEJM.2015Dec 10；373(24):2336-2346>对1120名20岁以下的儿童及青少年癌症患者的健康组织与肿瘤组织进行DNA序列分析，研究结果表明，在儿童及青少年癌症患者中，8.5％的患者中存在致病性或可能致病性的癌症易感基因胚系突变。对于大部分患者，家族病史并不能预测是否存在癌症易感性，即使家族史中没有出现过癌症，儿童也可能携带癌症易感基因。此研究提供了目前最全面的儿童癌症易感基因突变情况，发现肿瘤患儿的癌症易感基因突变率比人们认为的要高，这些突变将增加患癌症的风险。有助于人们进一步了解癌症发生机制。