[发明专利]检测细菌在丹参定殖能力的方法

说明书

本发明涉及一种检测细菌在丹参中定殖能力的方法，包括如下步骤：1)将待检测细菌接种于灭菌处理后的丹参幼苗中培养以使所接种的细菌定殖；2)将定殖好的丹参幼苗分别经过如下步骤处理并分组：W)无菌水冲洗；SD)灭菌的盐溶液洗涤10min～30min后再用无菌水冲洗；B)依次用灭菌的盐溶液洗涤、用次氯酸钠洗涤、用Nasubgt;2/subgt;Ssubgt;2/subgt;Osubgt;3/subgt;溶液冲洗；3)扩增各分组中定殖好的所述待检测细菌的特征性核酸片段，并将扩增结果进行染色，根据W、SD和B组是否出现目标条带以确定所述待检测细菌的定殖能力，在B组出现目标条带定值能力最强，SD组次之，W组最次。该方法能够更加客观评价细菌定殖能力。

技术领域

本发明涉及微生物-植物互作研究领域，具体而言，涉及一种检测细菌在丹参定殖能力的方法。

背景技术

现有科学研究和市面上出售的菌剂，都能在一定程度上影响植物的生长、发育以及代谢活动，尤其是植物促生菌(plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR)能够促进植物生长、防治病害、增加作物产量等作用。细菌在植物根系的成功定殖，在细菌与植物互作关系中起着极其重要的作用。由于实验室条件下很多促生效果显著的微生物，应用到大田却不能发挥较好的作用效果，其中定殖能力的强弱便是影响微生物发挥作用的关键。因此，接种有益菌能否成功定殖寄主植物根围或叶围，并且具备定殖能力强、定殖数量多等特点，是决定生防菌的直接作用效果、施用剂量以及应用转化等关键因素。

目前，最常用的细菌定殖检测方法包括显微镜检查和菌落计数，但都比较耗时费力且受人为操作影响较大。分子生物学能够进一步揭示细菌根部定殖的特殊规律，且检测结果较为准确，而现有的分子标记、荧光标记、特殊引物等研究生防细菌定殖丹参能力的检测方法相对较少。

发明内容

本发明涉及一种检测细菌在丹参中定殖能力的方法，包括如下步骤：

1)将待检测细菌接种于灭菌处理后的丹参幼苗中培养以使所接种的细菌定殖；

2)将定殖好的丹参幼苗分别经过如下步骤处理并分组：

W)无菌水冲洗；

SD)灭菌的盐溶液洗涤10min～30min后再用无菌水冲洗；

B)依次用灭菌的盐溶液洗涤10min～30min、用3％～7％(g/100ml)次氯酸钠洗涤1.5min～2.5min、用Na₂S₂O₃溶液冲洗；

其中，所述盐溶液包括以下组分：

127mM～147mM NaCl，1.7mM～3.7mM KCl，5mM～15mM Na₂HPO₄，1.3mM～2.3mMKH₂PO₄，0.3mM～0.7mM MgSO₄，0.7mM～1.3mM CaCl₂，0.07％～0.13％(v/v)Triton-X100，且所述盐溶液pH＝7.0～7.8；

3)扩增各分组中定殖好的所述待检测细菌的特征性核酸片段，并将扩增结果进行染色，根据W、SD和B组是否出现目标条带以确定所述待检测细菌的定殖能力，在B组出现目标条带定值能力最强，SD组次之，W组最次。

W、SD和B组的洗脱/灭菌能力有差别，W组最弱，B组最强，因而若B组出现目标条带的扩增产物，则说明出现目标对应的待检测细菌定殖能力较强。通过该方法，能够更加客观评价细菌定殖能力。

附图说明