[发明专利]铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用

说明书

本发明提供了一种铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用，涉及分子生物学技术领域，该Cu²⁺检测用荧光蛋白包括如Seq No.01所示的氨基酸序列。该蛋白可以高效的结合藻红色素PEB，发射强烈的橙色荧光，同时上述Cu²⁺检测用荧光蛋白对铜离子有特异性响应，可以选择性的被铜离子淬灭，而对其它离子基本没有影响。此外，该Cu²⁺检测用荧光蛋白还有较强的耐盐性，有效缓解了现有铜离子检测用荧光蛋白在高盐浓度下失去效用的问题。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用。

背景技术

重金属的检测和定量对于环境监测和生物临床毒理学检测是非常重要的。现有技术中，某些荧光蛋白由于蛋白质某个位点结合重金属使得发色团微环境的改变，造成荧光淬灭的效应，进而用来作为重金属的生物传感器，在一定的范围内，荧光蛋白的荧光强度取决于周围的重金属浓度。故可以建立起重金属和荧光蛋白荧光强度的关系，用荧光强度的淬灭效应反映重金属的浓度。

但是，目前已报道的荧光蛋白，例如：红色荧光蛋白DsRed，iq-Emerald，Dronpa，绿色荧光蛋白GFP等，在高盐浓度下荧光发射都会很快淬灭。使得这些蛋白质对高盐废水、盐碱地土壤的重金属检测失去效用。故发展耐盐的荧光蛋白并用于蛋白质荧光传感器具有重要的价值。

铜具有重要的生物学功能，但是过量会严重的危害到人类健康。因此，研究开发一种可以在高盐浓度下对重金属铜进行浓度检测的荧光检测产品，变得十分必要与迫切。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Cu²⁺检测用荧光蛋白及其应用，本发明通过利用重组共表达载体的方法将编码Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu²⁺检测用荧光蛋白。该荧光蛋白可以广泛应用于制备高盐环境下Cu²⁺荧光检测产品中。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供的一种Cu²⁺检测用荧光蛋白，所述Cu²⁺检测用荧光蛋白包括如SeqNo.01所示的氨基酸序列。

本发明提供的一种编码如上述Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列。

进一步的，所述核苷酸序列如Seq No.02所示。

本发明提供的一种重组共表达载体，所述重组共表达载体包含上述核苷酸序列和显色底物核苷酸序列。

进一步的，所述显色底物核苷酸序列包括藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS。

更进一步的，所述藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列如Seq No.03所示。

进一步的，所述重组共表达载体为原核细胞重组表达载体；

优选地，所述原核细胞重组表达载体包括pETDuet-1、pACYCDuet、或pCDFDuet中的任意一种；

优选地，所述原核细胞重组表达载体为pET Duet-1。

本发明提供的一种宿主细胞，所述宿主细胞包含上述重组共表达载体；

优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌；

优选地，所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。

本发明提供的一种上述Cu²⁺检测用荧光蛋白的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：