[发明专利]铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用

权利要求书

1.一种Cu²⁺检测用荧光蛋白，其特征在于，所述Cu²⁺检测用荧光蛋白如Seq No.01所示的氨基酸序列；

所述Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列如Seq No.02所示。

2.一种重组共表达载体，其特征在于，所述重组共表达载体包含权利要求1所述的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的重组共表达载体，其特征在于，所述显色底物核苷酸序列包括藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS。

4.根据权利要求3所述的重组共表达载体，其特征在于，所述藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列如Seq No.03所示。

5.根据权利要求2所述的重组共表达载体，其特征在于，所述重组共表达载体为原核细胞重组表达载体。

6.根据权利要求5所述的重组共表达载体，其特征在于，所述原核细胞重组表达载体包括pETDuet-1、pACYCDuet、或pCDFDuet中的任意一种。

7.根据权利要求6所述的重组共表达载体，其特征在于，所述原核细胞重组表达载体为pET Duet-1。

8.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体。

9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为包含权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体的大肠杆菌。

10.根据权利要求9所述的宿主细胞，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coli BL21。

11.一种根据权利要求1所述Cu²⁺检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

首先利用重组共表达载体将编码权利要求1所述Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu²⁺检测用荧光蛋白。

12.根据权利要求11所述的Cu²⁺检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对Cu²⁺检测用荧光蛋白进行纯化的步骤。

13.根据权利要求11所述的Cu²⁺检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体步骤如下：

（a）、获取编码权利要求1所述Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS；

（b）、将编码权利要求1所述Cu²⁺检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS与原核细胞重组表达载体结合，得到重组共表达载体；

（c）、将重组共表达载体转入宿主细胞诱导表达，纯化，得Cu²⁺检测用荧光蛋白。

14.如权利要求1所述的Cu²⁺检测用荧光蛋白、如权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体、如权利要求8~10任一项所述的宿主细胞在制备高盐环境下Cu²⁺荧光检测产品中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述高盐环境为1~5mol/L的NaCl盐溶液环境。