[发明专利]一种佐剂吸附组分疫苗含量的检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种佐剂吸附组分疫苗含量的检测方法。本发明解决现有的佐剂吸附组分疫苗含量检测方法灵敏度低的问题。该检测方法在佐剂吸附组分疫苗中加入吐温‑80溶液，经解吸附处理消除佐剂影响，通过标准曲线法，测定疫苗各组分含量。本方法具有检测灵敏度高、重复性好的特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种佐剂吸附组分疫苗含量的检测方法。

背景技术

在组分疫苗的质量控制中，对疫苗各组分的定量是重要质控项目之一。目前，组分疫苗中各组分的定量检测方法包括：

化学显色法：

疫苗中某些组分在特定波长范围内具有光吸收，或经化学处理后，形成具有光吸收的物质，其光吸收程度与含量有相关关系，可用于含量检测。例如，A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中的C群多糖，唾液酸是其有效成分之一，采用间苯二酚对C群脑膜炎球菌多糖中唾液酸抽提后，在585nm处有最大吸光值。该法的局限性在于，大部分多价疫苗中的各组分化学性质相近，寻找针对其中一个组分的化学处理方法比较困难。

色谱分析法：

阴离子色谱法用于多种单糖、双糖、寡糖、多糖的分析。例如，A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中的A群多糖，经酸水解处理后，产生6-磷酸甘露糖胺单体，采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定其含量。该法的局限性在于，实现多价疫苗中各组分的基线分离困难，色谱条件复杂，对试剂和环境要求高。

酶联免疫吸附法：

双抗体夹心ELISA法常用于抗原的定量检测。A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物含量检测采用双抗体夹心定量ELISA法。此方法需要制备各群多糖特异性单抗作为捕获抗体。单抗制备成本较高，产量较低，很难适应规模化检测需要。

免疫火箭电泳法：

免疫火箭电泳通过参照已知浓度的多糖在相同凝胶中的迁移率,对待测的不同浓度的多糖的迁移速率进行线性回归分析,可以初步计算多糖含量。该法操作过程复杂，是粗略测定多糖含量的一种方法。

速率比浊法：

速率比浊法是一种免疫化学方法，用于组分疫苗各组分含量的检测。该方法在抗体过量存在的条件下，抗原抗体形成复合物聚集体的速率与体系中存在的抗原量成一定的比例关系。利用该原理可检测混合物中某一抗原的含量。速率比浊法操作简便快捷，自动化程度高，不同的抗原可采用相同参数设置进行检测，可适应规模化检测的需要。

采用速率比浊法检测佐剂吸附组分疫苗含量，目前通用的方法是直接经解吸附处理，然后测定各组分含量。由于佐剂吸附疫苗抗原量较少，对检验方法的灵敏度要求较高。

因此，为了解决现有方法中存在的技术问题，本发明提供一种全新的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种佐剂吸附组分疫苗含量的检测方法。

本发明的方法可以有效的解决现有佐剂吸附组分疫苗含量检测方法灵敏度低、检测结果波动大的问题。

为了实现上述目的，本发明采取的策略为：在佐剂吸附组分疫苗中加入吐温-80溶液，经解吸附处理消除佐剂影响，通过标准曲线法，测定疫苗各组分含量。

本发明所述的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：佐剂吸附疫苗中加入吐温-80溶液；

步骤二：用碱将疫苗组分与佐剂解吸附，再用酸中和；

步骤三：疫苗中各组分单独配制定标工作液；

步骤四：定标工作液经步骤一和步骤二相同处理；