[发明专利]一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液包含终浓度为0.3～0.5N的氢氧化钾、终浓度为0.2～0.4M的乙酸钠、质量分数为0.03～0.07％的N‑月桂酰肌氨酸钠、终浓度为3～7mM的EDTA、体积分数为0.5～1.5％的吐温20、终浓度为0.1～0.3M的海藻糖。利用本发明中的裂解液或试剂盒进行实验时，能够实现样本加样无需混匀、无需加热，核酸裂解无需震荡，漂洗时无需吹散磁珠，只需静态浸泡一次，从而减少了实验室污染和核酸的丢失，反应液和磁珠无需混匀，核酸扩增无需洗脱，所得磁珠核酸全部参与PCR扩增反应，避免了移管所带来污染的可能性，大大缩短了检测时间，且低值样本重复性良好。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法。

背景技术

核酸提取技术是分子生物学研究的基础，也是进行病原微生物检测、物种鉴定、亲子鉴定、法医取证等常用的研究手段。然而，一个具备操作简单、操作步骤少、核酸得率高、而又不引起实验室气溶胶污染的方法，是目前临床分子生物学实验室质量建设的重点和难点。

目前，磁珠法已成为新兴的核酸提取技术，其主要原理是基于磁性纳米材料对核酸进行吸附，经过磁性分离和杂质漂洗后，将核酸从磁珠上洗脱下来，从而达到对核酸提取纯化的目的。传统的磁珠核酸提取方法使用的核酸裂解液大多是胍盐，其溶解度容易受到季节温度的影响而结晶析出，影响核酸裂解效能，降低了检测的重复性。同时由于传统的核酸磁珠提取方法操作步骤多，移管频繁，磁珠核酸需洗脱，有的方法为了增加核酸洗脱效率，甚至采用加入洗脱的方法，这些步骤都将增加核酸丢失和实验室污染的几率。总结传统方法的操作步骤，实验室污染和核酸丢失都与动态磁珠核酸提取有关。

因此需要寻找一种无需操作过程中的移管、震荡混匀、动态漂洗和加热洗脱等步骤的方法，这样不但可以大大简化操作步骤，同时实验室污染也可以得到有效控制。

发明内容

本发明的一个方面，是针对现有技术中的动态核酸制备方法中存在动力混匀导致核酸外泄污染、磁珠漂洗和PCR反应液与核酸磁珠需要吹散混匀、Tip头粘连大量核酸导致核酸丢失，同时提取效率低的问题，提供了一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法。

本发明提供的技术方案为：

一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液包含终浓度为0.3～0.5N的氢氧化钾、终浓度为0.2～0.4M的乙酸钠、质量分数为0.03～0.07％的N-月桂酰肌氨酸钠、终浓度为3～7mM的EDTA、体积分数为0.5～1.5％的吐温-20和终浓度为0.1～0.3M的海藻糖。

本发明的技术方案公开了一种样本加到裂解液中无需震荡、核酸磁珠漂洗无需吹散、PCR反应液无需与核酸磁珠混匀的静态核酸制备方法，几乎避免了整个核酸制备过程中的核酸丢失环节，由于本发明使用的核酸裂解液不是胍盐，也无蛋白酶K，结合简洁的操作步骤，大大提升了实验的可操作性和检测结果的重复性。

在本发明裂解液中包含了0.1～0.3M的海藻糖。作为优选，上述海藻糖的终浓度为0.2M。海藻糖参与核酸提取，可以起到增加液体粘稠度的作用，从而使磁珠一直处于悬浮状态，故整个核酸制备过程无需动力吹打混匀即可得到高纯度的核酸，除此之外，海藻糖还具有保护核酸的功能，使核酸保持完整，提高检测的敏感性。

通过以上方法配制的裂解液，无需混匀裂解液与样本即可充分裂解细胞，使核酸完全释放，并配合磁珠进行核酸吸附，使核酸提取效果达到最优；同时可以加快裂解速度，彻底去除蛋白质，无需震荡裂解，并且不受季节温度、盐离子浓度等影响，不需要苛刻的实验条件。

作为优选，在本发明的一个实施方式中，所述裂解液还包含体积分数为1～2％的超顺磁微球，所述超顺磁微球的粒径介于10～50nm。