[发明专利]一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法

权利要求书

1.一种磁珠法提取核酸的裂解液，其特征在于，所述裂解液包含终浓度为0.3～0.5N的氢氧化钾、终浓度为0.2～0.4M的乙酸钠、质量分数为0.03～0.07%的N-月桂酰肌氨酸钠、终浓度为3~7mM的EDTA、体积分数为0.5～1.5%的吐温20、终浓度为0.1～0.3M的海藻糖。

2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液还包含体积分数为1～2%的超顺磁微球，所述超顺磁微球的粒径介于10～50nm。

3.根据权利要求1或2所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液由以下组分组成：终浓度为0.4N的氢氧化钾、终浓度为0.3M的乙酸钠、质量分数为0.05%的N-月桂酰肌氨酸钠、终浓度为5mM EDTA、体积分数为1.0%的吐温20、体积分数为1.5%的超顺磁微球和终浓度为0.2M的海藻糖。

4.一种磁珠法静态制备核酸的方法，其特征在于，利用权利要求2～3中任意一项所述的裂解液裂解细胞或病原体后进行核酸提取，所述方法中使用的漂洗液的pH值为4～6。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1）将所述超顺磁微球按比例加入到裂解液中，得到磁珠裂解液；

步骤2）将样本加入到含有步骤1）得到的磁珠裂解液的扩增管中，无需混匀，室温静置5～10分钟；

步骤3）将上述扩增管放置于磁力架上，静置2～3分钟，待磁珠全部吸附至一侧后，将废液吸走；

步骤4）将漂洗液加入步骤3）得到的扩增管中，无需吹散磁珠，静置1～2分钟，将废液吸走；

步骤5）将扩增管从磁力架上取下，将配制好的PCR反应液加入到该扩增管中，PCR反应液无需与核酸磁珠混匀，直接进行PCR扩增。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2）所述样本为细胞、细菌、血清、血浆、唾液、尿液或胸腹水。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2）所述样本为血清或血浆。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2）所述样本的加入量为50μl～150μl。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤2）所述样本的加入量为100μl。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4）所述漂洗液为终浓度为0.2～0.4M的乙酸钠溶液、体积分数为0.5～1.5%的曲通X-100。

11.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤5）中所述PCR反应液的pH值为8.0～8.5。

12.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述磁珠裂解液、样本和漂洗液的体积比为1:1:2.5。

13.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1-3任意一项所述的裂解液。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含如权利要求5或10所述的漂洗液。

15.如权利要求1-3任意一项所述的裂解液，或如权利要求13或14所述的试剂盒在核酸制备中的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，其特征在于，所述用途为在检测用PCR、酶切、分子杂交、文库构建或Southern杂交过程中的核酸制备中的用途。