[发明专利]一种提取鲍肝胰腺代谢物的方法

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种提取鲍肝胰腺代谢物的方法，具体方法为：称量肝胰腺样品，加入甲醇水溶液后震荡破碎，再加入氯仿和水，涡旋，低温静置，离心，收集第一上清液；第一上清液冻干，加入甲醇水溶液，超声，静置，离心，收集第二上清液；收集第二上清液时剩下的沉淀再加入甲醇水溶液，超声，静置，离心，收集第三上清液；第二上清液和第三上清液混合冻干，加入磷酸盐缓冲液，震荡复溶，高速离心，所得到的第四上清液即为水溶性的鲍肝胰腺代谢物，本发明彻底消除了鲍肝胰腺中的多糖和色素的干扰，操作简单、成本低廉、稳定性强、回收率高，对其它多糖和色素含量高的动植物组织代谢物的提取有借鉴作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种提取鲍肝胰腺代谢物的方法。

背景技术

鲍被誉为海产“八珍之冠”，具有很高的营养和药用价值，是我国沿海地区一种重要的经济养殖贝类，同时也是一种理想的海洋环境监测指示生物。肝胰腺是鲍重要的消化组织，更是抵抗外部环境应激的重要免疫组织。在对其进行代谢组学研究时，肝胰腺中代谢物的提取是一个重要的环节。在基于核磁共振（NMR）的代谢组学研究中，以甲醇/氯仿/水作为提取溶剂的液–液萃取法在极性代谢物的提取中应用最为广泛。然而此方法不能有效地去除鲍肝胰腺中多糖及色素。多糖及色素会掩盖NMR谱图中一些重要代谢物的信号，从而严重影响这些重要代谢物的定量，使得后续分析无法进行。虽然使用超滤离心管能够有效地去除多糖和色素，但超滤离心管价格昂贵，不适合高通量、大规模使用。因此，有必要建立一种成本低廉、操作简单适用于鲍肝胰腺代谢物的提取方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了供一种提取鲍肝胰腺代谢物的方法，该方法提取得到的鲍肝胰腺代谢物无多糖和色素干扰，有利于后续的研究分析。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

本发明提供一种提取鲍肝胰腺代谢物的方法，包括以下步骤：

S1、将鲍肝胰腺置于离心管中，往鲍肝胰腺中加入甲醇（分析纯）和水，并加入钢珠，然后置于低温组织研磨仪中在4 ℃下震荡破碎，所述甲醇与水之间的体积百分比为50%～75%；

S2、往步骤S1中加入氯仿和水，混匀后于-4～0℃下静置不少于10 min；

S3、静置后进行离心处理，收集上层溶液转移到另一个离心管中；

S4、将步骤S3中得到的上层溶液置于-80 ℃的真空冷冻干燥机中真空冻干成冻干粉末；

S5、往冻干粉末中加入甲醇（分析纯）和水，经低温超声处理后于-4～0℃下静置不少于10 min，所述甲醇与水之间的体积百分比为80%～90%；

S6、静置后进行离心处理，收集上层溶液转移到另一个离心管中，并保留下层的沉淀；

S7、往步骤S6的沉淀中再加入甲醇（分析纯）和水，经低温超声处理后于-4～0℃下静置不少于10 min，所述甲醇与水之间的体积百分比为80%～90%；

S8、静置后进行离心处理，收集上层溶液并与步骤S6中得到的上层溶液混合；

S9、将步骤S8中得到的上层溶液置于-80 ℃的真空冷冻干燥机中进行真空冻干，得到粉末状的鲍肝胰腺代谢物；

S10、往步骤S9的鲍肝胰腺代谢物粉末中加入磷酸盐缓冲液，充分溶解（以不低于2500 rpm的速度涡旋1min以上）后进行离心处理，收集上层溶液即可得到水溶性的鲍肝胰腺代谢物。

优选的，按mg/mL计，步骤S1所述的鲍肝胰腺与甲醇之间的质量体积比为300: 1.0～1.4。

优选的，步骤S2所述的氯仿与步骤S1所述的甲醇之间的体积比为1～3: 1。