[发明专利]检测FANCA基因第14号外显子突变位点c.1235C＞T的引物和方法

说明书

本发明涉及一种检测FANCA基因第14号外显子突变位点c.1235C＞T的引物和方法。本发明公开了基于Sanger测序法检测人类FANCA基因突变的引物和应用，属于基因检测技术领域，本发明所述FANCA基因突变包含14号外显子；检测14号外显子突变的扩增引物的核苷酸序列如SEQ.ID NO.1和SEQ.ID NO.2所示，检测14号外显子突变的测序引物如SEQ.ID NO.3和SEQ.ID NO.4所示。本发明的引物适合Sanger测序法，使用Sanger测序操作简单，价格低廉且能灵敏地检测人类FANCA基因突变。

技术领域

本发明属于分子检测领域，特别涉及一种检测FANCA基因第14号外显子 突变位点c.1235C>T的引物和检测方法。

背景技术

范可尼贫血(FA)是一种罕见的常染色体或x染色体连锁的隐性遗传病，临床 表现为进行性加重的造血功能衰竭、先天性畸形及高风险进展为急性髓系白血 病，约50％的患者呈原发不孕。具不完全资料统计，本病在亚洲及世界一般人 群中的发病率为1/160 000。但由于奠基者效应及近亲婚配的原因在某些人群中 高发，比如在南非、西班牙、德系犹太人人群当中可高达1/20000或更高。在正 常人群中范可尼贫血的突变基因携带者频率为1/300。然而在本病高发人群与地 区其突变基因携带者频率可高达1/90。

FA的发生源于FA基因突变。FA基因是一组在DNA交联损伤中起同源重 组修复(HRR)作用的基因，其常见的突变类型包括FANCA、FANCC和FANCG。 其中FANCA基因亚型最为常见，它的基因被定位在染色体的第16号的长臂 (q24.3)，有43个外显子。蛋白由1445个氨基酸组成，分子量为163kDa。FANCA 约有200个不同的等位基因，包括几乎所有的已知的突变类型，大片段的缺失是 主要的突变类型。目前认为，FA是由于DNA内切酶异常阻碍了受损DNA自然 修复过程，进而引起染色体畸变，最终导致造血干细胞缺陷及多发性畸形。常规诊断FA主要依据全血细胞减少家族史、骨髓再生障碍、特征性先天畸形及染色 体断裂等。

有文献报道了FANCA基因外显子14c.1303C>T(P.R435C)突变位点和外显 子31c.3031C>T(P.R1011C)突变位点，导致该基因的第435位和1011位氨基酸 均由精氨酸变成半胱氨酸，通过蛋白功能预测分析，该突变对蛋白功能影响均为 有害。另有文献报道FANCA基因在韩国人群中的突变存在c.2546delC、 c.2778+1G>C、c.3520_3522delTGG、c.3627-1G>A、c.3720_3724delAAACA突变， 这些突变具有病理性作用。还有文献报道FANCA基因外显子14 c.1235C>T(P.A412V)，导致该基因的第412位氨基酸由丙氨酸变成缬氨酸，该突 变在范可尼贫血症中功能影响未知，可能为良性。

FA的治疗首选异基因造血干细胞移植，可修复受损细胞及改善FA造血微环 境，是提高患者长期无病生存率的惟一方法。在一个家族中鉴定FA基因的突变， 有助于进行产前诊断和围着床期的遗传学诊断及FA携带者的诊断。FA亚型和 FA基因突变的确证也是作基因治疗的必要前提。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测FANCA基因第14号外显子突变位点 1235C>T的试剂盒和检测方法，采用PCR技术，可用于快速检测患者体内FANCA 基因第14号外显子c.1235C>T位点的突变情况。所述检测FANCA基因第14号 外显子c.1235C>T位点突变情况的扩增引物和测序引物如权利要求1所述。

进一步地，引物SEQ.ID NO.1和SEQ.ID NO.2是扩增FANCA基因第14号外显 子的上下游扩增引物。

进一步地，引物SEQ.ID NO.3和SEQ.ID NO.4是检测扩增FANCA基因扩增产物 的上下游测序引物。