[发明专利]基于衍生化净化与反萃取富集技术分析鲜烟叶中烟碱异构体的方法

权利要求书

1.一种基于衍生化净化与反萃取富集技术分析鲜烟叶中烟碱异构体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1烟叶样品的预处理：先将采集的鲜烟叶样品进行速冻处理，然后采用冷冻干燥法干燥，干燥后将其研磨成粉末，得烟叶样品粉末备用；

S2、鲜烟叶样品中烟碱异构体的提取：将内标溶液和质量分数5％氢氧化钠溶液加入到样品粉末中，涡旋混匀，再加入二氯甲烷涡旋提取，离心分层，取下层清液过滤得提取液备用，其中，所述内标溶液为由乙腈配制的4,4'-联吡啶；

S3烟碱异构体色谱干扰峰的衍生化净化：向提取液中加入衍生化试剂和碱性催化剂，涡旋反应，离心，取下层清液，得净化液备用，其中，所述衍生化试剂为(1S)-(-)-莰烷酰氯，所述碱性催化剂为含质量分数20％氢氧化钠的水溶液；

S4、烟碱异构体反萃取富集：向净化液中加入反萃取溶剂，涡旋混匀，离心，取上层清液，得烟碱异构体溶液备用，其中，所述反萃取溶剂为0.5M HCl；

S5、液相色谱进样分离：在烟碱异构体溶液中加入氨水，采用液相色谱法进样分析检测，分离S-烟碱异构体和R-烟碱异构体，其中，液相色谱法采用的是全多孔材料3μmAMP 150x 3.0手性色谱柱，流动相A为正丙醇：甲醇＝80:20体积比，流动相B为10mM碳酸氢铵溶液，以体积比2.5％的浓缩氨水调节pH值，20％的A与80％的B等梯度洗脱；

S6、鲜烟叶样品中烟碱异构体组成的定性及定量分析：用S-烟碱异构体、R-烟碱异构体与外消旋体R/S-烟碱相应的保留时间进行定性，内标法进行定量，采用紫外检测器分析检测。

2.根据权利要求1所述的基于衍生化净化与反萃取富集技术分析鲜烟叶中烟碱异构体的方法，其特征在于：柱温为30℃；检测波长262nm；流速0.25mLmin^-1；进样量2μL；压力为3083psi。