[发明专利]犬支原体培养基及其制备方法

说明书

本发明提供了一种新型高效的犬支原体培养基QG5，该培养基是在支原体常规培养基FM‑4的基础上加入了犬血清、如SEQ ID：2序列所示的多肽T5、L‑天冬酰胺和NaCl。犬支原体在QG5培养基中能够实现迅速生长增殖，并且达到很高的活菌滴度,这有助于犬支原体的快速检测和诊断，有助于犬支原体的快速分离和解析，有助于犬支原体疫苗和治疗药物的开发，有助于犬支原体病机理机制研究。

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体涉及犬支原体培养基及其应用。

背景技术

支原体是目前已知能营独立生活、体积最小、构造最简单的原核微生物，其无细胞壁、无鞭毛、不运动，革兰氏染色阴性，但不易着色，在吉姆萨染色片中表现多形态球状体。多种支原体可以感染犬类，犬支原体主要引起犬呼吸道疾病、泌尿生殖道疾病、贫血症、关节炎及结肠炎等，如犬类易感嗜血支原体导致出现持续性发热、流涕、食欲不振，严重时会出现呕吐、腹泻等急性临床症状，并产生严重贫血或溶血性贫血，最终便血而亡。因此支原体是目前危害犬类健康和生命的重要疾病感染源之一，给养殖户和养殖场造成严重的经济损失，也会给伺养或豢养者造成潜在的感染风险。犬支原体病常伴随支原体与大肠杆菌、病毒等的混合感染，病情更加凶猛。

对于犬支原体病，分离培养是诊断支原体感染的金标准。除诊断外，支原体的分离培养有助于对支原体进行分型和生理生化研究、解析致病机制、开发疫苗和治疗药物等。然而由于犬支原体对外界环境十分敏感，对培养基的营养要求十分高，生长异常缓慢，分离难度很大，常规的支原体培养基对犬支原体分离和培养效果很差，导致其基础研究以及临床疫苗和药物研发等进展缓慢，因此亟需开发适合于犬支原体快速有效培养的培养基。申请人前期在研究鸽支原体和大肠杆菌混合感染的病鸽时，利用凝胶阻滞实验和质谱分析从相应体系中分离得到了8种支原体基因组DNA的结合多肽，其中2种能够很好促进鸽支原体的高效生长增殖。更进一步的，选择常见的家禽和家畜的典型支原体做其基因组DNA和这8种多肽的结合分析实验，发现其中2种可以和犬支原体基因组DNA结合，在此基础上结合常规支原体培养基研发得到了适合于犬支原体快速有效培养的培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供适合于犬支原体快速有效培养的培养基及其配制方法和应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

本发明提供了两种适合于犬支原体快速有效培养的培养基，分别是QG2和QG5培养基，均各自包括液体培养基和固体培养基。

QG2液体培养基的配方为：FM-4基础培养液 60%-64%，酵母浸出液（30%） 10%-12%，小牛血清 5%-8%，犬血清 1.0%-2.0%，多肽T2 （4ng/ml） 1.0%-1.5%，L-天冬酰胺 （1g/ml）0.02%-0.05%，NaCl （5g/ml） 0.12%-0.16%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚红（1%）0.003%，pH值调至7.6-7.8。优选地，最佳的QG2液体培养基配方为：FM-4基础培养液 62%，酵母浸出液（30%） 10%，小牛血清 6%，犬血清 1.5%，多肽T2 （4ng/ml） 1.2%，L-天冬酰胺（1g/ml） 0.04%，NaCl （5g/ml） 0.13%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚红（1%） 0.003%，pH值调至7.6-7.8。