[发明专利]犬支原体培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种犬支原体液体培养基QG5，其特征在于QG5液体培养基的配方为：FM-4基础培养液 60%-64%，酵母浸出液（30%） 10%-12%，小牛血清 5%-8%，犬血清 1.5%-2.5%，多肽T5（5ng/ml） 1.5%-2.0%，L-天冬酰胺 （1g/ml） 0.02%-0.05%，NaCl （5g/ml） 0.12%-0.16%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚红（1%） 0.003%，pH值调至7.6-7.8；配方中各液体组分的百分比添加量均是指体积体积分数, 30%酵母浸出液和1%的酚红中的百分比均是指质量体积分数；添加的FM-4基础培养液事先已经高压灭菌过了，而30%的酵母浸出液、小牛血清、犬血清、5ng/ml的多肽T5、1g/ml的L-天冬酰胺、5g/ml的NaCl、1×10⁵IU/ml的青霉素和1%的酚红配制后均采用0.22 μm滤膜过滤除菌；多肽T5序列如SEQ ID NO：2所示，可委托生物公司合成，纯度不低于95%。

2. 根据权利要求1所述的犬支原体液体培养基QG5，其特征在于最佳的QG5液体培养基配方为：FM-4基础培养液 62%，酵母浸出液（30%） 10%，小牛血清 7%，犬血清 2.0%，多肽T5（5ng/ml） 1.6%，L-天冬酰胺 （1g/ml） 0.04%，NaCl （5g/ml） 0.13%，青霉素（1×10⁵IU/ml）1.2%，酚红（1%） 0.003%，pH值调至7.6-7.8。

3. 如权利要求1或2所述的犬支原体液体培养基QG5的制备方法，其特征在于QG5液体培养基制备方法为：（1）先配制FM-4基础培养液，1000ml的FM-4基础培养液的配制方法为：称取NaCl 5.0g，KCl 0.4g, MgSO4‧7H₂O 0.2g，Na₂HPO₄‧12H₂O 1.6g，KH₂PO₄ 0.1g，葡萄糖10.0g，水解乳蛋白 5.0g，溶于超纯水中，115℃高压蒸汽灭菌20min后晾至室温备用，可依据该配方按比例配制各所需体积的FM-4基础培养液；（2）根据所需配制的QG5液体培养基体积按配方中的体积体积分数将事先配好并经0.22 μm滤膜过滤除菌了的酵母浸出液，小牛血清，犬血清，多肽T5，L-天冬酰胺，NaCl，青霉素和酚红充分混匀；（3）在无菌条件下，根据所需配制的QG5液体培养基体积按配方中的体积体积分数取（1）中已经高压灭菌的FM-4基础培养液，加入（2）中经过滤除菌的混合液，用灭菌水补齐定容，用灭菌的1mol/L的NaOH将pH值调至7.6-7.8，充分摇匀并分装，最后置于4℃保存备用。

4.如权利要求1或2所述的犬支原体液体培养基QG5对应的固体培养基的制备方法，其特征在于QG5固体培养基制备方法为：FM-4基础培养液加入1.5%质量体积分数的琼脂，115℃高压蒸汽灭菌20min，调成QG5液体培养基组份，并用灭菌的1mol/L的NaOH将pH值调至7.6-7.8，倾倒至平皿制成平板，4℃存放。

5.如权利要求1或2所述的QG5液体培养基在犬支原体的快速检测和诊断、犬支原体的快速分离和解析、犬支原体疫苗和治疗药物的开发以及犬支原体病机理机制研究中的应用。

6.如权利要求4所述的QG5固体培养基在犬支原体的快速检测和诊断、犬支原体的快速分离和解析、犬支原体疫苗和治疗药物的开发以及犬支原体病机理机制研究中的应用。