[发明专利]一种长单链DNA的制备方法

权利要求书

1.一种长单链DNA的制备方法，其特征在于，包括设计并构建重组噬菌粒，获得噬菌粒环状单链DNA，以及同时采用I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体切割环状单链DNA的步骤；

所述设计并构建重组噬菌粒，包括在目标单链DNA序列的5'端和3'端分别添加I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体的底物域序列，或分别添加I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体序列；

所述I类脱氧核酶为I-R3，其底物域序列如SEQ ID NO：1所示，酶域序列如SEQ ID NO：2所示的序列；

所述II类脱氧核酶突变体为II-R1a，II-R1b，II-R1c，II-R1d中的一种，所述II类脱氧核酶突变体为II-R1a的底物域序列如SEQ ID NO：3所示，酶域序列如SEQ ID NO：4所示的序列；

所述II类脱氧核酶突变体为II-R1b的底物域序列如SEQ ID NO：5所示，酶域序列如SEQID NO：6所示的序列；

所述II类脱氧核酶突变体为II-R1c的底物域序列如SEQ ID NO：7所示，酶域序列如SEQID NO：8所示的序列；

所述II类脱氧核酶突变体为II-R1d的底物域序列如SEQ ID NO：9所示，酶域序列如SEQID NO：10所示的序列。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述获得噬菌体环状单链DNA，包括将构建好的重组噬菌粒转化大肠杆菌细胞内进行复制，之后通过辅助噬菌体的侵染，离心去除大肠杆菌，收集上清并沉淀噬菌体颗粒，再利用碱裂解法剥去噬菌体蛋白外壳，即可得到所述环状单链DNA。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在切割环状单链DNA的步骤之后，还包括纯化回收酶切得到的所述长单链DNA。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述同时采用I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体切割环状单链DNA的温度为37℃-50℃，时间为0.5h-24h。

5.权利要求1-4任一项所述的制备方法或权利要求1-4任一项的制备方法制得的长单链DNA在DNA纳米、基因编辑、基因治疗、DNA探针等方面的应用。