[发明专利]固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法

说明书

本发明提供一种固相萃取‑高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，水样经HLB固相萃取柱富集净化，通过对比不同水样PH和金属络合剂Na₂EDTA加入量等条件下目标分析物的回收率确定了最佳前处理方法。采用Agilent Zorbax Rrhd Eclipse Plus C18(2.1×50mm，1.8μm)色谱柱，正离子模式下采用0.2％甲酸‑2mmol乙酸铵水溶液和甲醇‑乙腈(v/v，1:1)体系作为流动相，负离子模式采用纯水和甲醇‑乙腈(v/v，1:1)体系作为流动相，梯度洗脱进行色谱分离，在HPLC‑MS/MS多重反应监测模式下分析，内标法定量。应用该方法对贵阳市南明河地表水水样进行检测，共检出34种抗生素，检出总浓度在47.2ng/L～1740ng/L，其中大环内酯类检出浓度最高，平均浓度为257ng/L。

技术领域

本发明涉及一种水样检测方法，更具体的，涉及一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法。

背景技术

抗生素是一类可有效抑制微生物活性的化合物，具有预防和治疗人类和动物疾病、促进生长等作用，被广泛地应用于医疗、农业生产和畜牧养殖业。逐年增长的抗生素产量和销量引发的抗生素乱用滥用现象不容忽视。研究表明抗生素使用后不能完全被机体吸收代谢，约有60％～90％随着尿液或粪便进入环境，环境中的抗生素通过迁移转化进入水环境。水环境中抗生素残留在食物链中累计放大效应对水生生物存在潜在风险。其形成的抗性基因已经被世界卫生组织列为对公众健康和生态环境造成危害的三大威胁之一。抗生素种类众多，水环境中抗生素的残留现状受到广泛关注，目前我国水环境中已报道抗生素约68种，并且抗生素的单体性质差异大，实现同时高灵敏准确分析较困难，目前尚没有可参考的水中多种抗生素同时分析的标准方法。现有技术的抗生素检测方法普遍存在着检出数量少，灵敏度不高的问题，例如，Iglesias,A等采用小柱利用SPE富集净化技术同时分析地表水中12种抗生素，回收率为73.0～142％，远不能满足水中多种抗生素同时检测分析的需要。

发明内容

本申请实施例提供一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，采用SPE-HPLC-MS/MS技术，通过优化色谱、质谱条件以及前处理方法，建立了同时测定地表水中多种抗生素的分析方法，方法灵敏度高、准确性好，具有较强的实用价值。

本发明提供一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，包括以下步骤：

1)液相条件：选取Agilent Zorbax Rrhd Eclipse Plus C18色谱柱，所述色谱柱的规格为2.1×50mm，1.8μm；设置所述色谱柱的进样量为5μL；流速0.2mL/min；柱温40℃；

其中，氯霉素类化合物在负离子模式下进行分析检测，流动相A为超纯水，流动相B为体积比1:1的甲醇：乙腈，流动相梯度为0-2min，25-60％B；2-4min，60-80％B；4-5min，100％B，保持2min，7-7.01，100—25％B，7.01-9min，25％B；

其他化合物均在正离子模式下分析检测，无机相为0.2％甲酸水含2mmoL乙酸铵，流动相梯度为：0-0.5min，5％B；0.5-5min，5-20％B；5-10min，20-40％B，10-14min，40-70％B，14-17min，70-100％B，保持3min，20-20.01min，100-5％B，20.01-23min，5％B。

2)质谱条件：ESI+/ESI-切换；多重反应监测模式(MRM)，载气温度：325℃，载气流速6L/min，锥口电压45psi，鞘气温度370℃，鞘气流速12L/min，毛细管电压3500V；

3)样品前处理方法