[发明专利]固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法

权利要求书

1.一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)液相条件：选取Agilent Zorbax Rrhd Eclipse Plus C18色谱柱，所述色谱柱的规格为2.1×50mm，1.8μm；设置所述色谱柱的进样量为5μL；流速0.2mL/min；柱温40℃；

其中，氯霉素类化合物在负离子模式下进行分析检测，流动相A为超纯水，流动相B为体积比1:1的甲醇：乙腈，流动相梯度为0-2min，25-60％B；2-4min，60-80％B；4-5min，100％B，保持2min，7-7.01，100—25％B，7.01-9min，25％B；

其他化合物均在正离子模式下分析检测，无机相为0.2％甲酸水含2mmoL乙酸铵，流动相梯度为：0-0.5min，5％B；0.5-5min，5-20％B；5-10min，20-40％B，10-14min，40-70％B，14-17min，70-100％B，保持3min，20-20.01min，100-5％B，20.01-23min，5％B。

2)质谱条件：ESI+/ESI-切换；多重反应监测模式(MRM)，载气温度：325℃，载气流速6L/min，锥口电压45psi，鞘气温度370℃，鞘气流速12L/min，毛细管电压3500V；

3)样品前处理方法

水样静置，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤除去悬浮颗粒物，准确量取500mL水样调pH值至5，加入20ng内标指示物摇匀，准确加入0.25g Na₂EDTA，然后用规格为6cc/500mg的Oasis HLB小柱进行富集净化，HLB柱先依次用5mL甲醇和5mL超纯水进行活化，上样流速控制在2.0-5.0mL/min左右；上样后先用10mL超纯水清洗HLB小柱，并抽干，然后用6mL体积比为5:95的氨水：甲醇溶液作为洗脱液进行洗脱；洗脱液在35℃用N₂吹干浓缩至近干，最后用1:9甲醇水定容至0.5mL，12000r/min离心10min后取上层清液上机分析，内标法定量。

2.根据权利要求1所述的一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，所述内标指示物包括SMA-D4、SMX-D4、LIN-D3、THI-D4、TRI-D3、OFL-D3、SAR-D8、ERY-13C,D3、CAP-D5。

3.根据权利要求1或2所述的一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，所述抗生素有6类，包括：磺胺类(SAs)，喹诺酮类(QNs)，大环内酯类(MCs)，四环素类(TCs)，氯霉素类(CAPs)和其他类(CLOX、LIN、MON、SAL)。

4.根据权利要求1或2所述的一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，鞘气温度为370℃，EMV(+)和EMV(-)分别为400V、200V。

5.根据权利要求1-4之一所述的一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，还包括：

4)标准溶液的配制：准确称量标准品0.004g，用甲醇制成1.00g/L的标准储备液，于4℃保存，使用时用初始流动相稀释。

6.根据权利要求1-4之一所述的一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定地表水中多种抗生素的方法，其特征在于，调节待测定样品的PH为5。