[发明专利]一种用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的SSR引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的SSR引物组，其特征在于：包括10组引物对SSR1～SSR10，序列如SEQ ID NO.1～20所示。

2.权利要求1所述的用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的SSR引物组在鉴定甘蔗与斑茅杂交后代中含有斑茅血缘的材料或制备用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的试剂盒中的应用。

3.一种用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的SSR引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还包括用于PCR的试剂。

5.权利要求3或4所述的用于鉴定甘蔗中斑茅血缘的试剂盒在鉴定甘蔗与斑茅杂交后代中含有斑茅血缘的材料中的应用。

6.一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代中斑茅血缘的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）提取待鉴别甘蔗与斑茅杂交后代样品基因组DNA；

（2）以步骤（1）中提取的待鉴别样品基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物组或权利要求3或4所述的试剂盒进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

（3）将步骤（2）中PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，处理后并统计凝胶电泳结果；

（4）分析步骤（3）中的凝胶电泳结果，鉴定甘蔗与斑茅杂交后代中是否含有斑茅血缘；

步骤（4）中所述的鉴定的方法为：若凝胶上出现斑茅特异性条带即可判断待鉴别样品含有斑茅血缘；反之，不含斑茅血缘；各引物对扩增产物斑茅特异性条带位置为：SSR1在240bp位置出现条带；SSR2在185bp位置出现主带，在185～195bp之间出现1～2副带；SSR3在265bp位置出现主条带，在265～289bp之间出现1～2条副带；SSR4在250bp和275bp位置，两条条带同时出现或只出现其中一条；SSR5在185bp位置出现条带；SSR6在250bp位置出现条带；SSS7条在180 bp位置出现条带；SSR8在178 bp和165 bp位置，两条带同时出现；SSR9在280 bp位置出现条带；SSR10在245bp位置出现条带。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的PCR的体系为：每个引物对配制一个反应体系，每20µL反应体系中含DNA模板0.5µL，2×PCR扩增的预混液10 µL，10µmol•L^-1的每个引物对的上下游引物各0.5 µL，余量为水。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的PCR的条件为：94℃变性5min；94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s，33个循环；72℃总延伸10 min。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的电泳为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。