[发明专利]使用血小板和中性粒细胞诱导和监测NETs形成的体外方法

权利要求书

1.使用血小板和中性粒细胞诱导和监测NETs形成的体外方法，其特征在于，包括分离血小板和中性粒细胞、调整血小板悬液和中性粒细胞悬液浓度、将预激活血小板悬液和中性粒细胞悬液混合、培养混合细胞悬液构建荧光强度-时间动力学曲线。

2.根据权利要求1所述的方法，其中调整血小板悬液和中性粒细胞悬液浓度为调整血小板悬液浓度至100×10⁶/ml，调整中性粒细胞悬液浓度至1×10⁶/ml。

3.根据权利要求2所述的方法，其中将血小板悬液和中性粒细胞悬液混合为按中性粒细胞数：血小板数1:100混合。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中还包括激活血小板的步骤。

5.根据权利要求4的方法，其中激活血小板的步骤为向血小板悬液中加入凝血酶受体激活肽至50μmol/l，随后37℃和5%CO₂孵育30min。

6.根据权利要求1-5任一项的方法，其中还包括将血小板悬液和中性粒细胞悬液混合后向混合液中加入Sytox Green的步骤。

7.根据权利要求6的方法，其中加入Sytox Green至2μmol/l。

8.根据权利要求1-7任一项的方法，其中还包括培养混合细胞悬液构建荧光强度-时间动力学曲线的步骤，具体为：37℃恒温培养，监测混合细胞悬液内Sytox Green的荧光强度，间隔3min，持续2.5h，各时间点各组内所测荧光强度取平均值，以时间为横轴，荧光强度为纵轴构建荧光强度-时间动力学曲线。

9.根据权利要求1-8任一项的方法在制备NETs形成模型中的应用。

10.根据权利要求1-8任一项的方法在筛选抗炎、抗休克、抗血栓或抗动脉粥样硬化药物中的应用。

11.根据权利要求1-8任一项的方法在筛选抗脓毒症、缺血再灌注损伤、糖尿病、动脉粥样硬化、深静脉血栓或系统性红斑狼疮药物中的应用。