[发明专利]帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测引物、探针及检测试剂盒

权利要求书

1.帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，包括上游引物PALV_F和下游引物PALV_R；

上游引物PALV_F：catcaatggcaacaatcggtg；

下游引物PALV_R：attcagcatacctgtaattcgtac；

还包括与引物配合使用的探针，所述的探针核苷酸序列为：FAM-ttccatatacaacgtcggcaatgacaag-BHQ1。

2.如权利要求1所述的帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括：阴性对照模板、阳性对照模板、标准品模板和PCR扩增试剂；

所述的阴性对照模板为RNase-free水；

所述的阳性对照模板为PALV灭活病毒；

所述的标准品模板为PALV Seg-7 ssRNA。

3.如权利要求2所述的帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，PALV灭活病毒的拷贝数为2.6×10⁷拷贝/mL；PALV Seg-7 ssRNA的拷贝数为2.37×10¹⁴拷贝/mL。

4.如权利要求2所述的帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括One Step PrimeScript RT-PCR试剂和ROX参比染料。

5.如权利要求2所述的帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，其扩增体系为：

2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ，10.0 μL；

TaKaRa Ex Taq HS（5 U/μL），0.4 μL；

PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ，0.4 μL；

ROX Reference Dye Ⅱ（50×），0.4 μL；

上游引物PALV_F（10 μmol/L），1.6 μL；

下游引物PALV_R（10 μmol/L），1.6 μL；

探针（10 μmol/L），1.2 μL；

模板，1.0 μL；

RNase-free水，3.4 μL；

总计20.0 μL。

6.如权利要求2所述的帕利亚姆血清群病毒的实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增程序：

反转录42 ℃，5 min，共1个循环；预变性95 ℃，10 s，共1个循环；变性95 ℃，5s，退火60 ℃，34s，共40个循环。