[发明专利]一种区别CHUV、BCV与DAV的一步法三重RT-PCR检测引物及试剂盒

权利要求书

1.一种区别CHUV、BCV与DAV的一步法三重RT-PCR检测引物，其特征在于，包括3对引物，分别为CHUV-P1和CHUV-P2、BCV-P1和BCV-P2、DAV-P1和DAV-P2；

CHUV-P1：gaggctgtatgtggagtggagat（SEQ ID NO.1）；

CHUV-P2：tctatcaatggtcccacgcatct（SEQ ID NO.2）；

BCV-P1：gtgacgcaatctcaatggctctg（SEQ ID NO.3）；

BCV-P2：caacacatccgtccgccaattc（SEQ ID NO.4）；

DAV-P1：gcgagattgggatggatgtca（SEQ ID NO.5）；

DAV-P2：cagaytctccctttctcagat（SEQ ID NO.6）。

2.含有权利要求1所述区别CHUV、BCV与DAV的一步法三重RT-PCR检测引物的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括空白对照模板、阳性对照模板和PCR扩增试剂；

所述的空白对照模板为RNase Free Water；

所述的阳性对照模板有三个，分别为CHUV、BCV、DAV灭活病毒。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，CHUV、BCV与DAV病毒灭活前的滴度分别为4.5×10³PFU/mL、3.5×10³PFU/mL、6.2×10³PFU/mL，病毒使用β-丙内酯灭活。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括PrimeScript 1Step Enzyme Mix和2×1 Step Buffer。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，引物CHUV-P1：CHUV-P2：BCV-P1：BCV-P2：DAV-P1：DAV-P2的摩尔比为1：1：1.5：1.5：1.5：1.5。

7.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其扩增体系为：

共计：25μL。

8.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的扩增程序：50℃ 反转录30min；94℃ 灭活逆转录酶2 min；94℃ 预变性30 s、57℃ 退火30 s、72℃延伸 75s，30个循环；72℃终延伸10 min，4℃ 保存。