[发明专利]一种重金属暴露对细胞脂质代谢影响的检测方法

说明书

本发明公开了一种重金属暴露对细胞脂质代谢影响的检测方法，首先通过由重金属对PC12细胞暴露，提取细胞内脂质代谢产物，利用色谱质谱联用技术对脂质代谢产物进行检测分析，通过与对照组细胞的代谢物进行比较，根据代谢物变化显著性差异评价重金属对细胞产生的毒性作用机制，构建一种评估细胞受重金属暴露后脂代谢通路变化的方法；其中所述重金属为镉离子或砷离子。本发明能有效的分析重金属对细胞脂质代谢途径的影响，具有简单，快速，获得信息全面等优点。

技术领域

本发明属于水产品中重金属毒性评价领域，具体涉及一种重金属暴露对细胞脂质代谢影响的检测方法，是一种基于质谱的检测方法，通过水产品中重金属对细胞脂质代谢通路的影响水平来评估其细胞毒性。

背景技术

随着工业的发展，重金属通过多种方式进入海洋水产品中，使得多种水产品遭受重金属的污染。由于水产品的生物富集作用，各种重金属可以在其体内富集很高的浓度。最后高浓度的砷会随着食物链传递进入人体，然后通过各种过程转化为具有不同毒性的存在形态，影响人体的代谢过程，严重威胁着人类的生命。

目前针对重金属暴露对脂质代谢影响评定的方法还存在一定的问题，例如检测所需时间长、所需要的成本比较高、检测需要较高的技术手段与专业知识支撑，因此检测技术对于大众难以实现。本发明采用代谢组学技术对生物样本受到外界环境刺激以后其体内多种脂质代谢产物变化进行研究，其能够将生物体受到外界刺激后内部脂质代谢物的变化加以放大，来表征重金属的毒性机制。在此过程中借助于液相色谱与质谱联用技术，所需要的要求较低，操作简便、检测快速，弥补了上述所存在的问题。另外，生物体内含有多种脂质代谢产物，当其受到外界环境压力以后，会有多种脂质代谢产物随之发生变化，因此借助代谢组学与液相色谱质谱联用技术可以采集到更多的数据信息，从而可以实现对生物样本中脂质代谢产物的全景式分析。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种重金属暴露对细胞脂质代谢影响的检测方法，包括步骤：

S1、PC12细胞接种于细胞培养板中进行培养，培养时间为24～36小时；待细胞铺满孔板底部面积的75％～85％，用重金属对细胞进行暴露，20～26小时后收取细胞样品；

S2、上述细胞样品提取胞内脂质代谢产物；

S3、利用基于高相液相色谱-质谱对脂质代谢产物进行定量分析；对细胞内提取的脂质代谢产物信息进行单维统计分析与多维统计分析(包括偏最小二乘、热图等)。

优选方式下，所述重金属暴露对细胞脂质代谢影响的检测方法，包括步骤：

S1、使用重金属对细胞进行暴露：将PC 12细胞接种于细胞培养板中进行培养，接种密度为1.0×10⁵～1.5×10⁵个/ml，每孔培养基体积为2ml，37℃，5％CO₂培养24～36h；待细胞铺满孔板底部面积的75％～85％；遗弃原培养基，重金属暴露组每孔加入含重金属离子浓度6μM～24μM的培养基2ml，对照组加入2ml纯培养基，置于37℃，5％CO₂培养20～26h，每组设置4～8个平行；

其中，所述培养基为：含胎牛血清(四季青)、青链霉素双抗(Hycone)的DMEM高糖培养基(Gibco)；其中DMEM高糖培养基和胎牛血清体积比为为9:1，加体积分数为1％青链霉素双抗；