[发明专利]检测叶酸多态性位点相关基因的引物组合物、试剂盒以及试剂盒使用方法

权利要求书

1.一种检测叶酸多态性位点相关基因的引物组合物，其特征在于：

叶酸多态性位点相关基因包括MTHFR-RS1801133，MTRR-RS1801394，MTHFR-RS1801131；

引物组合物为扩增引物混合物，扩增引物混合物是根据上述每个待检测的叶酸多态性位点相关基因设计的PCR扩增引物的混合物，其中，PCR扩增引物基因序列如下表所示：

2.一种检测叶酸多态性位点相关基因的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述引物组合物。

3.根据权利要求2所述的一种检测叶酸多态性位点相关基因的试剂盒，其特征在于：还包括质谱延伸引物，

所述质谱延伸引物的长度为15-28个碱基，并且其3'端位于叶酸多态性位点相关基因突变位点，在延伸方向上的上一个碱基；其质谱延伸引物基因序列如下表所示：

4.一种如权利要求3所述的一种检测叶酸多态性位点相关基因的试剂盒的使用方法，其特征在于：

1)检测模板的制备：通过现有DNA提取试剂盒，提取待测样本DNA；

2)以提取的待测样本DNA为模板，使用引物组合物通过PCR扩增反应体系，获得靶序列扩增引物；

3)通过SAP酶反应体系处理，除去步骤2)获得的靶序列扩增引物中含有的未反应的dNTP；

4)将除去未反应dNTP的靶序列扩增引物，使用质谱延伸引物通过延伸反应体系，在延伸引物的3’端连接一个碱基，纯化后，从而得到延伸产物；

5)将纯化后的延伸产物在质谱仪上进行质谱检测；所得到的质谱峰图通过分析软件进行分析，得到分型结果。

5.根据权利要求4所述的一种检测叶酸多态性位点相关基因的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述PCR扩增反应体系，各试剂及其用量见下表：

其中，PCR扩增反应条件为94℃，2分钟；94℃变性30秒，56℃退火30秒，72℃延伸1分钟，共扩增45循环；最终72℃延伸5分钟。