[发明专利]一种YAP抑制剂及其筛选方法与应用

说明书

本发明公开了一种YAP抑制剂的筛选方法，该方法利用各带一半荧光基团的TAZ与YAP重组质粒转染细胞，构建得到异源二聚体为筛选剂从而可以通过荧光强度来筛选YAP的抑制剂。筛选得到的YAP抑制剂将有助于推动相关抗肿瘤药物的制备，提高骨及软骨肉瘤相关药物的疗效，并为新药物研发提供线索。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及YAP抑制剂的筛选方法及应用。

背景技术

骨肉瘤是一种儿童及青少年常见的原发性恶性肿瘤，其临床预后极差，严重威胁着患者的生命，给家庭及社会带来沉重的经济和精神负担。

目前，骨肉瘤发病的分子机制仍不清楚，主要包括：

1)成骨细胞发育相关信号通路如Hedghog，RUNX2，Hippo/YAP，BMP,Wnt/β-catenin，PKC等的异常；

2)转移相关信号通路如Notch、Fas/FasL、Ezrin、CXCR4、VEGF、MMP-2和MMP-9等的异常。

3)关键基因的突变或失活。针对当前骨肉瘤的发病机制，目前主要采取早期手术切除联合新辅助化疗等综合治疗。

然而，按照当前的治疗方案，复发性骨肉瘤及转移性骨肉瘤患者5年的生存率并没有得到明显提高，且临床高剂量化疗药物如甲氨蝶呤、阿霉素及顺铂等药物的使用具有较大的副作用。

软骨肉瘤(Chondrosarcoma)起源于软骨结缔组织或软骨，发病率在恶性骨肿瘤中仅次于骨肉瘤，约占骨恶性肿瘤10～20％。软骨肉瘤对传统的化疗和放疗极不敏感，手术切除仍是当前治疗的主要方法。然而，由于缺乏有效的辅助治疗，部分患者在手术切除后仍会复发。另外，软骨肉瘤的临床预后极差，严重威胁着患者的生命，给家庭及社会带来沉重的经济和精神负担。

Hippo-YAP通路是近年来发现的具有调节器官体积、维持细胞增殖凋亡平衡的信号通路，与肿瘤细胞的失控性增殖密切相关。哺乳动物中Hippo-YAP通路的主要功能是抑制转录调节因子YAP和TAZ的活性而负调控肿瘤的进程，因而Hippo通路也被认为是抑癌通路。具体来说，该通路的核心成员包括丝氨酸/苏氨酸激酶MST1、MST2、LATS1及LATS2，支架蛋白SAV1(与MST1和MST2结合)、MOB1(与LATS1和LATS2结合)，转录共激活子YAP，及包含TEA结合域的转录因子TEAD。简而言之，当Hippo通路激活时，MST1/2激酶磷酸化激活LATS1/2，激活的LATS1/2进而磷酸化YAP，磷酸化的YAP失活并随后出核，而细胞质内的YAP被蛋白酶体降解。

研究证实，Hippo通路参与多种肿瘤如肺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌等的进展。然而，在人类肿瘤中，Hippo通路的基因突变较少发生。基于此，得出人类肿瘤中Hippo通路的失调除了源自Hippo通路本身关键蛋白的突变之外，更多的是由于肿瘤细胞内其它异常表达的蛋白或信号通路与Hippo通路之间交叉对话。另外，Hippo信号通路在肿瘤中的作用与YAP/TAZ的核转位密切相关。最近，在多种肿瘤中发现YAP呈高表达，这与高的病理分级，晚期TNM阶段，淋巴结转移等相关，且存在细胞核定位的现象。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种基于荧光检测的YAP抑制剂的筛选方法。该方法通过利用各带一半荧光基团的表达YAP基因的重组质粒和表达TAZ基因的重组质粒所诱导表达的异源二聚体，能通过荧光信号的强弱变化而快速、有效地筛选出YAP抑制剂。

本发明的目的之二在于提供一种由该筛选方法得到的YAP抑制剂。

本发明的目的之三在于提供该YAP抑制剂在制备骨肿瘤药物中的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种YAP抑制剂的筛选方法，包括：