[发明专利]一种YAP抑制剂及其筛选方法与应用在审
| 申请号： | 201910972857.2 | 申请日： | 2019-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN110863001A | 公开（公告）日： | 2020-03-06 |
| 发明（设计）人： | 张还添;查振刚;桂涛;黎贞燕 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/85;C12N15/12 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 雷兴领 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 yap 抑制剂 及其 筛选 方法 应用 | ||
1.一种YAP抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括：
设计引物：设计扩增YAP基因的引物对和TAZ基因的引物对；
制备重组质粒：构建表达YAP基因的重组质粒，构建表达TAZ基因的重组质粒；其中，表达YAP基因的重组质粒和表达TAZ基因的重组质粒各带一半的荧光基团；
融合：将表达YAP基因的重组质粒和表达TAZ基因的重组质粒通过lipo2000转染入细胞中，诱导表达得到异源二聚体；
构建筛选模型：将待筛选的抑制剂加入已表达荧光的细胞的培养基中，处理24-48h，若荧光强度减弱，则该抑制剂为YAP的有效抑制剂。
2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，设计引物步骤中，所述TAZ的上游引物如SEQ ID No.1所示，所述TAZ的下游引物如SEQ ID No.2所示。
3.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，设计引物步骤中，所述的YAP上游引物如SEQ ID No.3所示，所述YAP的下游引物如SEQ ID No.4所示。
4.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，制备重组质粒步骤中，表达YAP和TAZ基因的载体质粒均为双分子荧光互补载体质粒。
5.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，制备重组质粒步骤中，表达YAP基因的载体质粒为pCMV-Myc-VN155-Linker-MCS。
6.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，制备重组质粒步骤中，表达TAZ基因的载体质粒为pCMV-HA-VC155-Linker-MCS。
7.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，制备重组质粒步骤中，以人293T细胞cDNA为模版扩增人TAZ和YAP基因。
8.由权利要求1-7任一项所述的筛选方法得到的YAP抑制剂。
9.如权利要求8所述的YAP抑制剂在制备骨肿瘤药物中的应用。
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