[发明专利]罗汉果新苷及其制备方法

说明书

一种罗汉果新苷及其制备方法，具体为:罗汉果新苷A(Neomogroside A)、罗汉果新苷B(Neomogroside B)，其化学结构为:本发明能够用于降糖药物的制备。该方法具有简便、快速、纯度高、生产成本低等优点。

技术领域

本发明涉及的是一种生物医药领域的技术，具体涉及一种罗汉果新苷A、罗汉果新苷B及其制备方法。

背景技术

罗汉果皂苷为罗汉果Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffery ex Lu etZ.Y.Zhang特有的四环三萜皂苷，具有显著的降血糖、降血脂、降血压活性；同时，罗汉果皂苷亦为天然甜味剂，具有安全性好、甜度高等优点，广泛应用于食品、饮料、药物之中。但迄今为止，已有的罗汉果皂苷均以β-罗汉果醇为苷元，尚未见以α-罗汉果醇为苷元的皂苷。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种罗汉果新苷及其制备方法，以罗汉果甜苷为原料，同时制备两种以α-罗汉果醇为苷元的高纯度罗汉果新苷，所得产物具有显著抑制α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶活性的特点，能够应用于降糖等领域。

本发明是通过以下技术方案实现的:

本发明涉及一类罗汉果新苷类化合物，即α-罗汉果醇为苷元的四环三萜皂苷，具体包括:罗汉果新苷A、罗汉果新苷B，其化学结构为:

本发明涉及上述罗汉果新苷类化合物的制备方法，以罗汉果甜苷为原料，经弯孢菌Curvularia lunata和总状毛霉Mucor racemosus组合发酵后制备得到，具体为:将市售罗汉果甜苷提取物经弯孢菌Curvularia lunata、总状毛霉Mucor racemosus组合发酵转化后，依次经萃取层析和HPLC制备分离，得到罗汉果新苷A和罗汉果新苷B精制品。

所述的弯孢菌取自市售真菌新月弯孢菌(Culvularia lunata)，微生物型培养物采集与基因库保藏编号MTCC5109；总状毛霉取自市售真菌总状毛霉(Mucor racemosus)，美国菌株保藏中心保藏编号ATCC42647。

所述的组合发酵，取弯孢菌Curvularia lunata和总状毛霉Mucor racemosus的质量比为1:3～3:1。

所述的发酵转化，取弯孢菌Curvularia lunata和总状毛霉Mucor racemosus的质量为甜苷质量的比例为1:10～3:10，发酵温度为25～30℃，发酵时间为3～5天。

所述的萃取，采用但不限于乙酸乙酯，乙酸乙酯与罗汉果甜苷质量的比例为1mL:8mg，萃取次数为2～3次。

所述的层析是指:将萃取物经硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱除去杂质；继用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱后TLC法检测，合并主斑点R_f为0.3～0.6的流份，然后回收溶剂得罗汉果新苷粗品。

所述的层析，优选其硅胶粒径为200～300目，样品与硅胶的质量比为1:60～1:100。

所述的梯度洗脱，优选二氯甲烷与甲醇比例为1:0、9:1、17:3、4:1(v/v)，每个梯度洗脱4～6BV，流速1BV/h，0.25BV/流份。收集洗脱液后进行TLC检测，合并主斑点R_f0.3～0.6的流份，减压回收溶剂，得罗汉果新苷粗品。

所述的TLC法检测是指:将样品溶于甲醇，硅胶板上点样，以二氯甲烷-甲醇4:1(v/v)为展开剂，展开后吹干展开剂，以10％硫酸-乙醇为显色剂，加热显色进行检测。

所述的HPLC制备分离是指:采用乙腈-水(1:9～1:0，v/v)梯度洗脱，DAD检测，分别收集两个最大吸收波长为205nm的主峰，回收溶剂即得罗汉果新苷A、罗汉果新苷B精制品。