[发明专利]地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法

权利要求书

1.一种地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)提取待测样品的总DNA，将提取的总DNA序列进行PCR扩增，测序得到峰图，再使用CondonCodeAligner软件对峰图拼接并剪切其5.8S和28S端保守序列，得到ITS2序列；

(2)把步骤(1)获得的待测样品的ITS2序列与地乌/地乌基原植物的ITS2序列进行K2P遗传距离和系统邻接树比较；

(3)如待测样品与地乌/地乌基原植物的ITS2序列的种内最大K2P遗传距离小于其与混伪品最小种间K2P遗传距离，或经系统邻接树比较为同一支，则待测样品为真品。

2.如权利要求1所述的地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法的建立方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)用植物基因组DNA提取试剂盒提取地乌/地乌基原植物的总DNA，提取的总DNA序列经过PCR扩增，测序得到峰图，再使用CondonCodeAligner软件对峰图拼接并剪切其5.8S和28S端保守序列，得到地乌/地乌基原植物的ITS2序列；

(2)根据地乌/地乌基原植物的ITS2序列、同属近缘混伪品DNA序列的碱基种类和排列顺序，分别计算地乌/地乌基原植物种内遗传距离及其与同属近缘混伪品的种间遗传距离，并根据地乌/地乌基原植物的ITS2序列、同属近缘混伪品DNA序列构建系统邻接树；

(3)以地乌/地乌基原植物与同属近缘混伪品最小种间K2P遗传距离大于地乌/地乌基原植物种内最大K2P遗传距离为指标，以及系统邻接树的支系为指标，得到地乌/地乌基原植物真伪鉴定方法。

3.如权利要求2所述的地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法的建立方法，其特征在于：

所述步骤(1)PCR扩增体系如下：

PCR扩增体系以25μL为参照，包括2×PCR Mix 12.5μL，正反引物各1μL，模板DNA2μL，灭菌双蒸水8.5μL。

4.如权利要求2所述的地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法的建立方法，其特征在于：

所述步骤(1)PCR扩增使用的通用引物如下：

ITS2序列扩增正向引物ITS2-2F：5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'；

ITS2序列扩增反向引物ITS2-3R：5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'。

5.如权利要求2所述的地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法的建立方法，其特征在于：

所述步骤(1)的PCR扩增程序是94℃变性5分钟；94℃变性30秒，56℃退火30秒，72℃延伸45秒，35～40个循环；72℃延伸10分钟；

琼脂糖凝胶电泳检测PCR情况。

6.如权利要求2所述的地乌/地乌基原植物DNA条形码鉴定方法的建立方法，其特征在于：

所述步骤(2)中，同属近缘混伪品DNA序列是从同属近缘混伪品样品中提取得到的同属近缘混伪品的ITS2序列；

从同属近缘混伪品样品中提取得到同属近缘混伪品的ITS2序列的过程为：用植物基因组DNA提取试剂盒提取同属近缘混伪品的总DNA序列经过PCR扩增，测序得到峰图，再使用CondonCodeAligner软件对峰图拼接并剪切其5.8S和28S端保守序列，得到同属近缘混伪品的ITS2序列。