[发明专利]硬粒小麦成株抗叶锈病位点的竞争性等位基因特异聚合酶链式反应标记及其应用有效
| 申请号： | 201910961864.2 | 申请日： | 2019-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN110592260B | 公开（公告）日： | 2021-03-02 |
| 发明（设计）人： | 兰彩霞;李志康;袁婵 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 王华英 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小麦 成株抗 叶锈病 竞争性 等位基因 特异 聚合 链式反应 标记 及其 应用 | ||
1.一种筛选抗叶锈病硬粒小麦的方法，其特征在于，采用竞争性等位基因特异聚合酶链式反应标记的引物进行检测筛选；其中，所述竞争性等位基因特异聚合酶链式反应标记为BA00138075，或所述竞争性等位基因特异聚合酶链式反应标记为BA00138075与BA00606902的组合；
所述BA00138075的引物序列中，左引物F1为GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCCATACTTGCAGTTACAGGTTAG，左引物F2为GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCCATACTTGCAGTTACAGGTTAC，右引物R为GCAGAATTTTTGGGTTAACTCGG；
所述BA00606902的引物序列中，左引物F1为GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAAGCTGCATGAGATTGCTACA，左引物F2为
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAAGCTGCATGAGATTGCTACG，右引物R为ACTACAATGTACCTGATGAATCCCC。
2.如权利要求1所述的筛选抗叶锈病硬粒小麦的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，提供一待测硬粒小麦的基因组DNA； S2，以所述待测硬粒小麦的基因组DNA为模板，采用所述竞争性等位基因特异聚合酶链式反应标记的引物分别进行聚合酶链式反应扩增；S3，检测所述扩增反应后的基因型。
3.如权利要求2所述的筛选抗叶锈病硬粒小麦的方法，其特征在于，所述待测硬粒小麦的基因组DNA的浓度为50纳克/微升。
4.如权利要求2所述的筛选抗叶锈病硬粒小麦的方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述聚合酶链式反应扩增包括以下步骤：（1）94℃变性15min；（2）94℃变性20s，65℃退火60s，每循环一次降0.8℃，10个循环；（3）94℃变性20s，57℃退火60s，32个循环。
5.如权利要求2所述的筛选抗叶锈病硬粒小麦的方法，其特征在于，在所述步骤S3中，采用荧光定量分析所述扩增反应后的基因型。
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