[发明专利]一种用于单细胞测序的膀胱尿路上皮单细胞悬液的制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于单细胞测序的膀胱尿路上皮单细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将处死后的动物进行全身血液灌注，将采集到的膀胱进行孵育、酶解消化即获得单细胞悬浮液；

所述全身血液灌注具体方法包括：向动物左心室内注入D-PBS溶液，D-PBS溶液进入体循环后，肝脏颜色由深变浅；当血液从右心耳流出时，打开左心耳，继续注入D-PBS溶液，直至肺完全变白或接近完全变白；观察到膀胱褪色则全身血液灌注成功；

所述膀胱孵育、酶解消化具体方法为：

S1、将采集并处理后的膀胱使用dispase II溶液进行孵育处理，所述dispase II溶液的浓度为2 mg/ml，溶剂采用DMEM培养基，所述孵育处理条件为：在37℃条件下孵育1.5h；然后使用PBS-EDTA溶液冲洗3次；

S2、使用PBS-EDTA溶液孵育经步骤S1处理后的膀胱，孵育处理条件为在冰浴条件下孵育1.5h；

S3、收集步骤S2中的孵育处理后的PBS-EDTA溶液，离心，取上清液加入胰蛋白酶消化细胞；离心转速控制为300g，离心处理时间为5min；酶解处理时间控制为1min；

所述制备方法还包括将孵育、酶解消化后的细胞悬液进行酶解消化中和、过滤、离心和重悬；

所述酶解消化中和的缓冲溶液为D-PBS缓冲溶液，其中含有0.04%BSA；

所述过滤采用细胞过滤器进行过滤；所述过滤方法具体为依次使用70μm细胞过滤器和40μm细胞过滤器进行过滤；

所述离心的转速控制为300g，离心处理时间为5min。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述动物包括哺乳动物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述动物包括啮齿动物，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、地鼠和豚鼠。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述啮齿动物为小鼠。

5.如权利要求1-4任一项所述制备方法，其特征在于，所述制备方法各步骤在无菌条件下进行；或，所述制备方法自步骤S2开始，所有步骤均在冰上操作完成。

6.权利要求1-5任一项所述制备方法在单细胞测序中的应用。