[发明专利]一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物及其制备方法有效
| 申请号： | 201910959057.7 | 申请日： | 2019-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN110680918B | 公开（公告）日： | 2023-02-28 |
| 发明（设计）人： | 马雁冰;张启书;李思瑾;李维冉;袁明翠;黄惟巍 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所 |
| 主分类号： | A61K39/39 | 分类号： | A61K39/39;A61K39/12;A61K47/34;A61K47/32;A61K9/10;A61K9/107;A61P35/00;A61P15/00;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京国林贸知识产权代理有限公司 11001 | 代理人： | 郑俊彦;许文娟 |
| 地址： | 650118 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 atp 佐剂 hpv 纳米 疫苗 组合 及其 制备 方法 | ||
1.一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将HPV16 E744-62冻干肽溶解于无菌水中，使其形成第一水相溶液(W1)；
(2)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶于二氯甲烷中，低温条件下搅拌使PLGA完全溶解，形成油相(O)；
(3)将聚乙烯醇(PVA)溶解于无菌水中，使其形成含有聚乙烯醇的第二水相溶液(W2)；
(4)将第一水相溶液在低温搅拌条件下均匀滴加到油相中混合，以形成水-油混合液，再将所述的水-油混合液进行超声乳化以形成第一乳液(W1/O)；
(5)在第一乳液中加入第二水相溶液，进行第二次超声乳化以形成第二乳液(W1/O/W2)；
(6)将得到的第二乳液在冰浴条件下固化后，转入通风橱中搅拌以完全蒸发二氯甲烷，而后离心以沉淀制备成的包封HPV16 E744-62的PLGA纳米疫苗(E7-PLGA)，并用无菌水洗涤，最后用PBS重悬得到E7-PLGA纳米疫苗；
(7)将腺苷三磷酸(ATP)溶于PBS中，得到ATP溶液，将ATP溶液与步骤(6)制备得到的E7-PLGA纳米疫苗在低温下涡旋混合，制备得所述的HPV纳米疫苗组合物。
2.根据权利要求1所述的以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的超声乳化条件为：总时间1分钟，超声30秒，间隔5秒，功率30％，温度4摄氏度。
3.根据权利要求1所述的以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述的超声乳化条件为：总时间5分钟，超声30秒，间隔5秒，功率30％，温度4摄氏度。
4.一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物，其特征在于，所述组合物由权利要求1-3任一项所述制备方法制备得到。
5.一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物，其特征在于，所述组合物包括E7-PLGA纳米疫苗和ATP佐剂；
所述E7-PLGA纳米疫苗的制备方法包括以下步骤：
(1)将HPV16 E744-62冻干肽溶解于无菌水中，使其形成第一水相溶液(W1)；
(2)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶于二氯甲烷中，低温条件下搅拌使PLGA完全溶解，形成油相(O)；
(3)将聚乙烯醇(PVA)溶解于无菌水中，使其形成含有聚乙烯醇的第二水相溶液(W2)；
(4)将第一水相溶液在低温搅拌条件下均匀滴加到油相中混合，以形成水-油混合液，再将所述的水-油混合液进行超声乳化以形成第一乳液(W1/O)；
(5)在第一乳液中加入第二水相溶液，进行第二次超声乳化以形成第二乳液(W1/O/W2)；
(6)将得到的第二乳液在冰浴条件下固化后，转入通风橱中搅拌以完全蒸发二氯甲烷，而后离心以沉淀制备成的包封HPV16 E744-62的PLGA纳米疫苗(E7-PLGA)，并用无菌水洗涤，最后用PBS重悬得到E7-PLGA纳米疫苗。
6.根据权利要求5所述的以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物，其特征在于，所述HPV纳米疫苗组合物中ATP的浓度为10μM。
7.根据权利要求5所述的以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物，其特征在于，所述E7-PLGA纳米疫苗的粒径在100nm-300nm之间。
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