[发明专利]一种高产γ-氨基丁酸的解淀粉芽孢杆菌及其用途

权利要求书

1.一种高产γ-氨基丁酸的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，筛选方法包括以下步骤：(1)取地表下6cm附近的土壤，加入100mL蒸馏水，于37℃条件下将土壤和蒸馏水混合均匀后，混合液于80℃孵育1h；(2)取100μL浓度为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5的土壤稀释液滴于LB平板中央，涂布均匀，然后于37℃培养箱中培养；(3)分离出颜色为污白色或微带黄色且边缘不规整，呈现典型“火山口”状的单菌落，接种于LB培养基，于37℃培养箱培养12h；(4)对菌落进行涂片、革兰氏染色和镜检，筛选出呈蓝紫色杆状的菌；(5)将步骤(4)获得的解淀粉芽孢杆菌接于牛肉膏蛋白胨培养基液体内进行种子液培养，振荡培养13h后，接种于LandⅢ培养基内进行发酵培养，30℃振荡培养48h；(6)用Berthelot比色法对步骤(5)获得的发酵液上清进行定性检测，筛选得到所述高产γ-氨基丁酸的解淀粉芽孢杆菌。

2.根据权利要求1所述的高产γ-氨基丁酸的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的高产γ-氨基丁酸的解淀粉芽孢杆菌在生产γ-氨基丁酸中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述生产γ-氨基丁酸的方法为发酵法。

5.一种生产γ-氨基丁酸的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基包含以下浓度的组分：麦芽糊精8g/L、L-谷氨酸钠9g/L、MgSO₄ 1g/L、KH₂PO₄ 1g/L、NaHPO₄ 0.8g/L和MnSO₄6mg/L。

6.根据权利要求5所述生产γ-氨基丁酸的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基pH值＝7。

7.根据权利要求5或6所述的发酵培养基在生产γ-氨基丁酸中的用途。

8.一种生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌于牛肉膏蛋白胨培养基液体内进行种子液培养；(2)将步骤(1)获得的种子液接种于权利要求5或6所述的发酵培养基内进行发酵培养；(3)用Berthelot比色法对步骤(2)获得的发酵液上清进行定性检测；(4)RP-HPLC纯化步骤(3)中的发酵液，制备得到γ-氨基丁酸。

9.根据权利要求8所述的生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括以下步骤：A、取步骤(3)中的发酵液50ml，超声破碎5min，加入体积分数为5.0％的三氯乙酸去除杂蛋白，离心10min，取上清液，0.45μm滤膜过滤；B、样品衍生：按体积比为1:1向步骤A产物中加入衍生剂，避光混合反应5min，然后经0.22μm微孔滤膜过滤；所述衍生剂制备方法如下：将邻苯二甲醛25mg和β-MCE 40μL溶于0.5ml甲醇中，然后加入0.4mol/L硼酸缓冲液(pH值9.6)5ml；C、色谱条件：色谱柱为UltimateXB-C18(21.2×250mm)，流动相A：流动相B＝3：7变为7：3，变化时间为50min，流速为4.0ml/min，流动相A为20mmol/l醋酸钠溶液(调节pH值至7.2)，流动相B为20mmol/l醋酸钠溶液、甲醇和乙腈的混合液，其中醋酸钠溶液、甲醇和乙腈的体积比为1:2:2，流动相A和流动相B经0.22μm滤膜过滤，检测波长为332nm。