[发明专利]一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶T及应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，旨在提供一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶T及应用。该氨基肽酶T的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于编码前述氨基肽酶T的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明获得的重组氨基肽酶T(Lmo1603编码的蛋白)具有氨基肽酶活性，并且对部分金属离子具有较强依赖性。基于此特性，本发明获得的重组氨基肽酶T能够用于蛋白质的深度水解。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶T及应用。

背景技术

氨基肽酶(Aminopeptidases，APs)是广泛存在于动物、植物和微生物中的一种金属蛋白水解酶。氨基肽酶识别多肽N端氨基酸残基，并水解产生游离氨基酸。比如最常见的亮氨酸氨基肽酶，可以水解多肽N端亮氨酸残基，生成游离亮氨酸和多肽。在真核细胞当中氨基肽酶有多种功能。如蛋白的加工、成熟、转化，调控多肽类的水解、基因表达等。氨基肽酶除以上功能外，还存在于转运机制中。例如幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)中的ABC多肽转运系统(PepTs)，转运蛋白Dpp和Opp可介导转运多肽；同时有氨基肽酶PepA参与效应蛋白的转运，可特异性水解效应蛋白，这对于细菌在宿主细胞内存活和感染至关重要；幽门螺旋杆菌能够在胃液中生存并且致病主要是由于存在抗酸能力，在宿主细胞内主要的能量来源是丙氨酸(L-alanine)、丝氨酸(L-serine)和其它相关的6种D-氨基酸。与此类似的胞内寄生菌，单增李斯特菌同样需要效应因子，有助于黏附侵蚀和胞内增殖，并需要氨基肽酶协助效应因子的加工及成熟，同时需要氨基肽酶作用便于提供细菌胞内存活的营养来源等，但是这一机制目前尚未证实。

在单增李斯特菌EGD-e基因组中注释氨基肽酶的基因有：lmo1780(pepTM20.003)、lmo2338(pepC C01.086)、lmo1709(map M24A)、lmo1578(M24.008)、lmo1354(M24B)、lmo1711(M29.004)和lmo1603(未知)(http://www.uniprot.org/)。虽然注释为氨基肽酶活性，但是具体功能如何，尚未有研究证实。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶T及应用。

与现有技术相比，本发明的解决方案是：

提供一种来源于单增李斯特菌的氨基肽酶T，该氨基肽酶T的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明还提供了用于编码前述氨基肽酶T的基因，该基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

所述氨基肽酶T的基因通过下述方法制备获得：

根据Genbank中收录的单增李斯特菌(Listeria.monocytogenes)EGD-e NC_003210的lmo1603基因序列设计合成上游引物和下游引物(SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4)，然后以单增李斯特菌(Listeria.monocytogenes)EGD-e NC_003210的基因组DNA为模板，利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因扩增，获得目的基因。

扩增过程中所用引物如下：

上游引物：GCGCATATGAGAGATGCAAGAATCGAAAAATTAGCA

下游引物：CCGCTCGAGTACTAAGTTTTCTGGATTAAGTGCTTCTAATTCT

其中，上游引物(SEQ ID NO.3)的下划线部分为Nde I酶切位点，下游引物(SEQ IDNO.4)的下划线部分为Xho I酶切位点。